冰冻切片免疫荧光细胞技术的改良

中国实用医药2011年1月第6卷第3期ChinaPracMed，Jan2011，Vol．6，No．3

·119·

（3/69），有效率2.9%（2/69），无效5.8%（4/69），总有效率

94.2%（61/69）。

所有患者在复查时均行泪道冲洗及鼻内镜检查，术后泪

最小口径1mm，最大口径5囊造口多呈卵圆形或裂隙状，

mm。8例无效患者中，有5例为早期实施阶段的病例，由于

手术适应证把握不准及临床经验不足，其余失败3例可能为仅电话随访，溢泪减轻，泪道冲洗欠通畅。术后未能及时复诊，1年后复诊，溢泪同术前，鼻腔泪囊造口闭锁。3

讨论

随着鼻内镜在国内的推广应用，经鼻内镜施行泪囊鼻腔造口术亦渐增多。本法的主要优点是鼻内镜提供了清晰的直观视野，使手术更为准确细微、面部无瘢痕、泪囊周围组织损

创口愈合快、不影响再次手术，同时可对阻塞泪道的鼻伤少、

病进行处理，方法简便、并发症少。

为了提高经鼻内镜泪囊鼻腔造口术疗效，减少手术并发症，细致的术前检查、熟悉有关局部解剖，根据患者病情实施个体化的手术操作及术后随访及处理十分重要。

术前通过碘油造影了解鼻泪管阻塞情况，因为，只有鼻泪管阻塞才是泪囊鼻腔造口术的手术适应证。同时，术前经常规鼻内镜检查以了解鼻中隔是否偏曲、鼻腔是否狭窄、鼻甲是有无鼻窦炎或鼻息肉均对于制定手术方案必不可少。否肥大、

［1，2，3］

熟悉解剖是手术成功的关键要达到定位准确无误、操作省力、省时、手术成功率高，其关键在于对泪囊鼻腔内的

［4］

表面投影掌握准确，一般认为该手术失败率平均为15%当今文献报道的数据不准确会误导鼻科医师手术时造口偏低，甚至造口在鼻泪管上，这可能是手术失败的主要原因之一。Wormald［5］等认为，泪囊在鼻腔外侧壁的投影定位大部分位

于中鼻甲腋的前外上方，小部分位于中鼻甲腋的前外下方。

我们通过解剖研究及临床实践也基本得出相同的结论。由于泪囊顶往往接近额窦底，故骨孔造得高些一般不会有很大风险。

术后处理旨在及时清理术腔及其周围分泌物、凝血块、肉芽与水肿、坏死黏膜，防止泪囊造孔堵塞、避免鼻腔粘连。经手术时间短、组织损鼻内镜泪囊鼻腔造口术具有不影响美观、伤小、出血少、视野清晰、可同期处理鼻腔病变等诸多优点，且手术效果接近于传统手术，符合现代外科手术的微创要求，满足了患者尤其是年轻女性美容的需求。

只要恰当掌握手术适应证、熟悉相关解剖、牢记手术操作要点并仔细操作、术后定期随访，就可能获得满意的治疗效果。

参

考

文

献

［1］周文光，周玫，李泽卿，等．鼻内窥镜泪囊造孔术的初步体会．中

1995，30（增刊）：27-28.华耳鼻咽喉科杂志，

［2］KennedyDW，BolgerWE，ZinreichSJ．Diseasesofthesinuses：di-agnosisandmanagement．London，B．C．DeckerInc，2001，317-324.［3］贾沛靓，唐海红，张速勤．鼻内泪囊应用解剖．国际耳鼻咽喉头

2006，30（2）：102-104．颈外科杂志，

［4］WelhamR，WulcA．Manaegmentofunsuccessfullacrimalsurgery．

BrJOphthalmol，1987，71：52-57.

［5］WormaldPJ，KewJ，HasseltAV．Intranasalanatomyofthensocri-malsacinendoscopicdacryocystorhinostomy．OtholaryngolHead2000，123：307-310.NeckSurg，

冰冻切片免疫荧光细胞技术的改良

郑燕璇

王晓鸿

孟晓军

【摘要】由于免疫荧光细胞化学的特异性、快速性和在细胞水平定位的敏感性与准确性，已在病

理学诊断方面得到广泛应用。本文就我科多年的荧光技术实际操作中的经验体会做个介绍。

【关键词】冰冻切片；免疫荧光细胞化学；免疫荧光细胞化学技术

免疫荧光细胞化学技术是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，由于其特异性、快速性及准确性，在病理学诊断方面已得到广泛应用，其中以直接法更为简便、快速。现就我们科多年来在肾穿、皮肤组织免疫荧光操作中的体会做个总结。

1资料与方法1.1

肾穿、皮肤组织冰冻切片数张荧光抗体

1.2方法①将肾穿、皮肤标本置于恒温冷冻机的冷冻

加少许OCT包埋剂，于冷室内－25℃冷冻切片，厚度要头上，

材料

［2］

［1］

甘油封片。

2结果

根据显现的荧光强度来判断免疫复合物的多少，其观察

；高倍下隐约可结果分为6级：镜下未见免疫复合物荧光：-［4］

高倍镜下可见：+；低倍镜下可见：±；低倍镜下隐约可见、

见、高倍镜清晰可见：++；低倍镜下清晰可见，高倍镜下耀高倍镜下刺眼：++++。眼：+++；低倍镜下耀眼，3讨论

是根据抗原抗体反应的原理，先将

已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧

免疫荧光细胞化学

光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学

［5］

求3～4um，根据所备抗体切出相应数量的片子；②用冷风

机将切片吹干；③将pH7.4的PBS液平铺于切片上，浸泡2min；④将稀释好的荧光抗体滴于切片上，在37℃温箱内孵育8～10min；⑤甩去切片上的荧光抗体，用pH7.4的PBS液平铺浸泡切片2min；⑥用纸巾擦去组织周边的液体，滴加缓冲

作者单位：519000中山大学附属第五医院病理科通迅作者：王晓鸿

E-mail：david_20070424@126.com

［3］

·120·

技术。

中国实用医药2011年1月第6卷第3期ChinaPracMed，Jan2011，Vol．6，No．3

免疫荧光细胞化学分直接法、间接法和补体法，其中直接

法是最简便、快速的方法。用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光抗体，直接用于细胞或组织抗原的检查，此法特异性高，在病理学诊断方面得到广泛应用。

［6］

传统的免疫荧光操作步骤是：①冰冻切片在室温下电风扇吹干；②pH7.4的PBS液中洗片数次；③荧光素标记的特

疫荧光背景清晰；③特异性荧光抗体用pH7.40.01mol/L的PBS液稀释30倍，尤其在皮肤荧光时，其特异性抗体IgG我们甚至稀释到120倍，避免抗体浓度过高造成的假强阳性；④荧光抗体与组织孵育时间改为8～10min，此时观察荧光效果较好。孵育时间过长时，荧光已开始衰退，影响诊断。经过对免疫荧光传统操作方法的改良，我们不仅节省了抗体，缩短了

而且避免了组织脱片及背景着色，提高了染片操作时间，效果。

参

［1］

异性抗体以pH7.40.01mol/L的PBS液稀释20倍，滴于切

片上，在37℃温箱内孵育15～30min；④PBS液中洗切片5min×2次，洗去未与组织结合的抗体；⑤室温下轻度风干切片；⑥滴加缓冲甘油封片。

我们科在多年实际操作中，对免疫荧光传统操作方法进

现介绍如下：①在制备冰冻切片上，皮肤组织与肾行了改良，

穿组织有所不同，因其结构特殊性使得皮肤组织在荧光操作

中易掉片，因此在做皮肤荧光时，我们选用了防脱载玻片；②将冰冻切片用PBS液平铺，浸泡2min。在以往操作中，我们用PBS液冲洗切片数次（清除组织周边的包埋剂及未与组织结合的特异性荧光抗体），不管操作过程如何小心，在观看荧光时总能见到组织或部分脱落、或部分重叠，影响荧光结果的判断。在改用PBS液平铺浸泡切片后，不仅能避免组织脱

重叠，而且切片经浸泡后，组织周边的包埋剂清洗干净，免落、

考文献

王伯沄，李玉松．免疫荧光细胞化学技术．病理学技术，2000，381．

［2］郑燕璇，王晓鸿．肾活检标本的检查方法及意义．中国实用医

2010，102．药，

［3］王伯沄，2000，88．李玉松．组织切片技术．病理学技术，

［4］邹万忠，王海燕．肾活检标本的处理和病理检查方法．肾活检病

2006，24．理学，

［5］［6］

王伯沄，李玉松．免疫荧光细胞化学技术．病理学技术，2000，380．

王伯沄，李玉松．肾活检标本的制作技术．病理学技术，2000，949．

跟骨钢板治疗跟骨骨折63例体会

卢伟

刘国庆

【摘要】目的探讨跟骨钢板治疗跟骨骨折体会。方法跟骨关节内骨折51人63例，全部采用

63例跟骨骨折均达到骨性愈合，4例跟骨钢板内固定。结果随访一年，出现2例钢板外露，外侧切口，

无感染、内固定折断及距下关节创伤性关节炎及跟痛症。结论跟骨关节内骨折如要获局部皮肤麻木，

得好的功能，应该解剖复位跟骨关节面及跟骨外形，跟骨钢板治疗跟骨骨折目前是最佳选择。

【关键词】跟骨钢板；跟骨骨折；皮肤坏死

跟骨骨折为跗骨骨折中最常见者，约占全部跗骨骨折的60%，以青壮年伤者最多，多由高处跌下，足部着地，足跟遭受

［1］

垂直撞击所致。近年来，尽管很多学者为改善治疗效果做了大量工作，但跟骨骨折特别是关节内骨折的治疗效果一直

大显露。复位：掀开跟骨外侧壁，显露后关节面。寻找骨折

线，认清关节面骨折情况。取出载距突关节面外侧压缩移位的关节内骨折块。使用斯氏针或跟骨牵引，先内翻跟骨结节，同时向下牵引，再外翻，以纠正跟骨短缩及跟骨结节内翻，使跟骨内侧壁复位，用克氏针维持复位。然后把取出的关节面

放回外侧壁并恢复Gissane角和跟骰关节，克氏骨折块复位，

针固定各骨折块。透视检查骨折位置，尤其是Broden位查看

跟骨后关节面是否完全复位。固定：根据骨折类型选用跟骨钢板和松质骨螺钉固定。如可能螺钉应固定外侧壁到对侧载距突下骨皮质上，以保证确实可靠。固定后，伤口放置引流管。术后处理：两周拆线；6～10周部分负重；12～16周完全负重，逐渐开始正常活动。1.3

63例跟骨骨折均达随访结果术后随访6个月～1年，到骨性愈合，临床愈合时间为1.5～2.5月，平均1.9个月；骨性愈合时间为4～8个月，平均4.9个月，因软组织条件差及过度剥离出现2例钢板外露；因手术时损伤腓肠神经出现4例局部皮肤麻木；63例无感染、内固定折断及距下关节创伤性关节炎，术后踝关节活动良好，无跟痛现象发生。2讨论2.1

手术适应证选择对于跟骨关节内骨折是否需要手术治疗，多年来一直存在争议。由于缺乏统一的分类方法和术

不能令人满意。以往对跟骨骨折的治疗常常偏于保守，一般

采用石膏外固定或者克氏针内固定，效果欠佳。经过多年研究，大量病例已证明跟骨关节内骨折如要获得好的功能，应该

我们采用跟解剖复位跟骨关节面及跟骨外形。2007年以来，骨钢板治疗跟骨骨折63例，临床效果满意，现报告如下。

1资料与方法1.1

一般资料本组63例中，男40人50例，其中双侧10例；女11人13例，其中双侧2例。年龄17～55岁，平均34岁。其中闭合性损伤60例，开放性损伤3例；伤后至就诊时间最长7d，最短1h。1.2

手术方法体位：单侧骨折侧卧。如为双侧骨折，则取俯卧。切口：外侧L形切口。纵行切口位于跟腱和腓骨长短

水平切口位于外踝尖部和足底皮肤之间。切开皮肌腱之间，

肤后，从骨膜下翻起皮瓣，显露距下关节和跟骰关节，用三根克氏针从皮瓣下分别钻入腓骨、距骨和骰骨后向上弯曲以扩

作者单位：459000河南省济源市人民医院骨科