实时荧光定量PCR
组织RNA 提取：
一般认为100mg 肝组织提取RNA 500ng，100mg 肺提取RNA 200ng，脑内的RNA 丰度适中，100mg 脑组织，提取RNA 5-200ng 。所以一个10mg 的海马可匀出RNA 约为20ng 。 反转录反应
反转录反应参照TaKaRa RT-PCR说明书。 反转录反应条件如下。
37°C 15 min（反转录反应） 85°C 5 sec（反转录酶的失活反应）
Real Time PCR反应
选用脑源神经营养因子（BDNF ）为目标基因，核糖体18S rRNA(18S rRNA)做为内参。
1） 按下列组份配制PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行）。
全班40人，分为5组，每组做8管。4管做BDNF ，4管做18S rRNA。4管BDNF 或者18S rRNA ，采用相应的正反PCR 引物。每种基因做两个模板，一个模板采用原液浓度，一个模板采用稀释一倍浓度，体积均为0.5 μl。
2）三步法PCR 首先95°C 作用3 min。 PCR 进行35个循环。
步骤 变性 退火 延伸 融解曲线 温度 95°C 55°C 95°C
温度 95°C 58°C 72°C
时间 30 秒 30 秒 30 秒
时间 0秒 15秒 0秒
变温速度 20°C/秒 20°C/秒 0.1°C/秒