中国中医药科技２０１４年７月第２ｌ卷第４期Ｊｕｌｙ
２０１４ＶｏＬ２１Ｎｏ．４
・４１３・
管花肉苁蓉水提物安全性研究
张娟卿德刚
孙宇倪慧△
贾晓光
（新疆维吾尔自治区中药民族药研究所・中国医学科学院药用植物研究所新疆分所・乌鲁木齐８３０００２）
摘要
目的：研究管花肉苁蓉水提物的安全性。方法：ＳＰＦ级昆明种小鼠、清洁级ＳＤ大鼠，分别进行
急性经口毒性试验、Ａｍｅｓ试验、小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验、小鼠精子畸形试验及９０天喂养试验，观察管花肉苁蓉提取物毒性、致突变作用。结果：管花肉苁蓉提取物急性经口毒性试验Ｍ’Ｄ＞２０９／ｋｇ，属无
毒级；骨髓微核实验、精子畸形实验、Ａｍｅｓ实验表明该样品无致突变作用；９０天喂养试验对大鼠未见明
显毒副作用。结论：管花肉苁蓉提取物有较好的安全性。关键词管花肉苁蓉提取物安全性评价
管花肉苁蓉Ｃ／ｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｃｈｒｅｎｋ）Ｗｉｇｈｔ为肉苁蓉药用品种之一¨１，具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，现代药理学研究表明其具有壮阳、抗衰老、增强记忆力、降血脂、调节免疫、抗疲劳等多种药理作用［２“Ｊ。管花肉苁蓉主
ｌｃｇ肉苡蓉提取物）、阴性对照组（灭菌蒸馏水）、阳性对照组（Ｏ．０４∥ｋｇ环磷酰胺）。末次给药后６小时颈椎脱臼处死动物，常规取材、制片、镜检，每只鼠计数１０００个骨髓嗜多染
红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，并计数２００个嗜多染红细胞，观察与成熟红细胞的比值（ＰＣＥ／ＲＢＣ），计算微核率（‰）。
２．３
产于新疆南疆地区，当地少数民族常将其作为炖汤、煮肉、泡
茶、泡酒、下面之品食用，具有较好的药食两用价值。但由于管花肉苁蓉只是在局部地区有食用习俗，研究者更多的是关注其药理活性，对于管花肉苁蓉的食用安全性文献研究较
小鼠精子畸形实验雄性清洁级昆明种小鼠２５只，体
质量２５—３５９，随机分５组。受试剂量、溶液配制及灌胃量均
少。本实验对管花肉苁蓉水提物进行安全性研究，为其开发
利用提供更充分的科学依据。１材料
１－１样品的制备将管花肉苁蓉水煮、浓缩、干燥制得，ｌｇ提取物中相当于６９药材。
同２．２微核试验，阳性对照组（ｏ．０４９／ｋｇ环磷酰胺）腹腔注
射。每日１次，连续５天，末次给受试物后３０天处死动物，
取副睾滤液涂片，伊红染色，每只动物计数ｌ（ＤＯ个结构完
整的精子，计算畸变精子发生率（％）。
２．４
Ａｍｅｓ实验用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组
１．２主要仪器ＭＤ２００—３上皿式电子天平；ＣＸＡ奥林巴
斯双瞳显微镜；ＸＴＬ—Ｉ型连续变倍体视显微镜；５００石蜡旋
氨酸缺陷型ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡｌ００、ＴＡｌ０２菌株和多氯联苯（ＰＣＢ）诱导的大鼠肝微粒体酶（ｓ一９）进行试验。设５个实
验剂量组（Ｏ．００８、０．０４０、０．２００、１．０００、５．０００ｍｓ／ｎｎ）及自发回变组、溶剂对照组（蒸馏水）和阳性对照组（突变剂）。阳
转式切片机；码一１２Ｈ生物组织自动脱水机；ＢＭ—ＶＩ生物
组织冷冻包埋机；ＬＥＩＴ２２０显微镜；雅培ＣＤ３７００全自动血球
计数仪；ＯＬＹＭＰＵＳＡＵ４００全自动生化分析仪。
１．３动物ＳＰＦ级昆明种小鼠，ＳＤ大鼠，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号ＳＣＸＫ（湘）２００９—００１２．２实验方法
２．１
性剂：一Ｓ９：ＴＡ９７、ＴＡ９８为９一芴酮（０．２∥皿），ＴＡｌ００为ＮａＮ３（１．５∥皿），ＴＡｌ０２为ＭＭＣ（０．５ｐｇ／ｍｒ）。＋Ｓ９：
ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡｌ００为２一ＡＦ（１００．ｏｇｓ／ｍ１），ＴＡｌ０２为１．８一二羟基蒽醌（５０．０ｔ，．ｓ／ｍ１），观察各组回变菌落数变化。
２．５
急性经１３＇毒性实验清洁级昆明种小鼠２０只，体质量
９０天喂养实验清洁级ＳＤ大鼠８０只，雌雄各半，随
１８—２２９，雌雄各半。
采用最大耐受剂量法，剂量为２０９／ｋｇ，称取管花肉苁蓉提取物５０９，加灭菌蒸馏水定容至１００ｍＬ，按０．２ｎｆｌ．／１０９，间隔４小时，分２次给予，灌胃后连续观察１４天，记录中毒表现及死亡情况。
２．２小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验清洁级昆明种小鼠５０只，体质量２５～３０９，随机分５组，雌雄各半。采用间隔２４小时两次经口灌胃法，设低、中、高剂量组（２．５、５．０、１０．ｏｇ／
机分４组。低、中、高剂量组分别为１．３３、２．６７、４．００ｇ／ｌ【ｇ，
各组均按１．０ｍＬ／１００９灌胃，溶剂对照为蒸馏水，每日１次，
连续９０天。每天记录给食量和剩食量，每周称１次体重，计算食物利用率。实验中期，禁食１６小时，采血至抗凝管和非
抗凝管，抗凝管全血用雅培ＣＤ３７００全自动血球计数仪测定血红蛋白、红细胞压积，进行红细胞、自细胞、血小板计数及白细胞分类；非抗凝管血分离血清后用０ＬＹＭＰｕｓＡＵ４００全自动生化分析仪测定总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮、谷丙转
氨酶、谷草转氨酶、胆固醇、甘油三酯和血糖。实验末期同上
｛科技支疆项目Ｎｏ．２０１１９１１５２乌鲁木齐市科技计划项目Ｎｏ．Ｙ“１△通讯作者
１２００（１０４
禁食，摘眼球采血测定血常规及血生化指标，禁食前和禁食后称重动物体重，采血后颈椎脱臼处死动物作大体解剖，取
肝、肾、脾、胃、肠、睾丸（卵巢）做病理切片检查。
万方数据
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２．６统计学处理采用ＳＰＳＳｌｌ．０统计软件，先对数据进行
方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比
较，发现差异再用Ｄｕｎｎｅｔｔ法进行检验。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍方差不齐，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，采用不要求方差齐性的
Ｔａｍｈａｎｅ’ｓ咒检验进行两两比较。检验水准ｄ＝０．０５。
３结果
３．１急性经ｌ：ｒ毒性实验以２０９／ｋｇ剂量灌胃后，未出现任何不良体征，观察１４天，未见明显中毒症状，无死亡。解剖检查主要脏器未见明显异常变化。雌雄小鼠急性经口毒性实验最大耐受剂量（ＭＴＤ）均＞２０∥ｋｇ。管花肉苁蓉提取物属无毒级。
３．２小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验经灌胃，雌雄小鼠各剂量组骨髓微核发生率未发生明显改变（受检ＰＣＥ数为５０００），各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），阳性组与阴性组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），即管花肉苁蓉提取物微核实验结果为阴性，见表１。
表１各组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验结果（ｚ±ｓ，ｎ＝５）组别
含微核含微核微核率（‰）ＰＣＥ／ＲＢＣ
阴性对照组１．４±０．９１．１０２±０．１３ｌ阳性对照组２１．４±１．１‘
１．０３３±０．０５２低剂量组
７町５
１．Ｏ±０．７１．１５３－ｔ－Ｏ．１１３雄性
中剂量组４０．８±１．１１．１３３±０．０８９高剂量组５
１．Ｏ±１．Ｏ１．１１１±０．０ｒ７２阴性对照组１．Ｏ±１．４１．１２９±Ｏ．０９ｌ阳性对照组２４．４±２．７‘１．０４５±０．０３４
低剂量组
５砣８
１．６±Ｏ．５１．１２５±０．１４４
雌性
中剂量组７１．４±ｏ．５１．１４６±ｏ．０９８高剂量组
６
１．２±１．１
１．０９６±０．０７０
与阴性对照组比较・Ｐ＜Ｏ．０５
３．３小鼠精子畸形实验见表２。
表２各组小鼠精子畸形检测结果（ｎ＝５）
组别畸芎票于数专耄尹
堕壅耋型！全！
不定形无钩香蕉胖头双头尾尾折
与阴性对照组比较｛Ｐ＜０．０５
３．４
Ａｍｅｓ试验对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型ＴＡ９７、
ＴＡ９８、ＴＡｌ００、ＴＡｌ０２
４株菌株，加与不加Ｓ一９时，各剂量组
回变菌落数均未超过自发回变菌落数的２倍，亦无剂量一反映关系，未见有致突变作用，而阳性对照组明显大于自发回变菌落数，见表３。
３．５
９０天喂养试验９０天喂养试验期间，各剂量组动物生
长发育、活动正常，无异常行为和中毒症状，无死亡。喂养期间，各剂量组雌、雄大鼠体重增长、进食量、食物利用率、血常
万方数据
表３
Ａｍ∞试验结果（；±ｓ）
规指标、血生化指标、脏器重量、脏器／体重比值与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），各剂量组大鼠的肝、脾、肾、胃、肠、睾丸（卵巢）均未见与实验因素有关的组织病理学变化。经口毒性试验表明管花肉苁蓉水提物ＭＴＤ＞２０９／ｋｇ，属无毒
物；３项遗传毒性实验结果均为阴性，管花肉苁蓉水提物无
致突变作用；９０天喂养试验未见样品对大鼠有明显毒副作用；管花肉苁蓉水提物有较好的安全性。
４．２管花肉苁蓉产业是生态经济型产业，种植肉苁蓉必先种植红柳，红柳为防风固沙的先锋植物，对生态环境有良好的保护作用。新疆和田地区人工种植管花肉苁蓉已达３０万亩以上，伴随着管花肉苁蓉种植规模与产量的逐渐扩大，仅
在药品上的使用规模是无法促进该产业的良好发展。本实验依据民间食用管花肉苁蓉的方法，对管花肉苁蓉的水提物
进行了安全性评价研究，为其在食品等领域的使用提供了一定的科学参考依据。
参考文献
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中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典．北京：化学工业出版社，２０１０：１２６．
［２］侯志华，常国文．肉苁蓉的药理学研究进展．中国民族医药杂志，２００３，９（４）：３．
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鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响，天然产物研究与开发，２００９，２１（２）：２２０．
［４］吴波，顾少菊，傅玉梅，等．肉苁蓉和管花肉苁蓉通便与补肾
壮阳药理作用的研究．中医药学刊，２００３，２１（４）：５３９．［５］
张洪泉，翁晓静，陈莉莉，等．管花肉苁蓉麦角甾苷对衰老小鼠端粒酶活性和免疫功能的影响．中国药理学与毒理学杂志，２００８，２２（４）：２７０．［６］
卿德刚。张娟，倪慧，等．管花肉苁蓉复方制剂缓解体力疲劳功能研究．新疆中医药，２０１１，２９（２）：３７．［７］
中华人民共和国卫生部．保健食品检验与评价技术规范．
２００３：１６７．
（收稿：２０１３—０９—１３）
４讨论
４．１本实验根据《保健食品检验与评价技术规范》Ｆ１，急性