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・论著・
植物蛋白胨在肺炎链球菌培养基中的应用
邓雪莲颜熙熙
张锐王静毕俊虹
【摘要】目的用植物蛋白胨替代目前肺炎链球菌（ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ，Ｐｎ）培养基中的动物蛋白胨，
以保证生物制品的安全性。方法
比较大豆蛋白胨与胰蛋白胨的各种成分含量。分别以大豆蛋白胨
和胰蛋白胨制备培养基进行９个型Ｐｎ大罐培养，比较两种培养基培养对Ｐｎ生长和粗制多糖含量的影响。结果大豆蛋白胨的总氮含量、氨氮含量和消化系数与胰蛋白胨相近，但大豆蛋白胨的总碳水化
合物含量（３３６．２０肛∥ｇ）明显高于胰蛋白胨的总碳水化合物含量（１０．５６斗ｇ／ｇ）。植物源性培养基培养
获得的各型Ｐｎ浓度（ｔ＝３．８５１，Ｐ＜Ｏ．０５）和粗制多糖含量（ｔ＝３．８５３，Ｐ＜０．０５）职显高于动物源性培养基培养。结论植物蛋白胨可替代动物蛋白胨来制备Ｐｎ培养基。
【关键词】
植物蛋白类；培养基；链球菌，肺炎；多糖类，细菌
ＴｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｈｙｔｏｎｅｉｎｔｈｅｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍＤｅｎｇＸｕｅｌｉａｎ＋，ＹｅｎＸｉｘｉ，ＺｈａｎｇＲｕｉ，
Ｗａｎｇ
Ｊｉｎｇ，ＢｉＪｕｎｈｏｎｇ．＋ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｕｌｔｕｒｅＭｅｄｉｕｍ，ＣｈｅｎｇｄｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ
ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＣｏ．，Ｌｔｄ．，
Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００６３，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
ａｕｔｈｏｒ：ＤｅｎｇＸｕｃｌｉａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｄｅｎｇ＿ｘｕｅｌ３６＠ｓｉｎｅ．ｃｏｒｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏｒｅｐｌａｃｅａｎｉｍａｌｐｅｐｔｏｎｅｂｙｐｈｙｔｏｎｅｉｎｔｈｅｐｎｅｕｍｏｃｏｅｃａｌｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｉｎ
ｏｒｄｃｒ
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Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
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【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｐｌａｎｔ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｂａｃｔｅｒｉａｌ
肺炎链球菌（ｐｎｅｕｍｏｅｏｅｃｕｓ，Ｐｎ）为带荚膜的革纯化制备而成。Ｐｎ生长对营养物质要求较高，普通兰阳性双球菌，其荚膜多糖为重要致病因子，可引培养基上不生长，需要营养丰富的培养基才能良好起肺炎、脑膜炎、中耳炎、菌血症、心内膜炎等疾病，生长旧Ｊ。成都生物制品研究所有限责任公司（成都并可导致慢性阻塞性肺部疾病患者等高危人群并公司）目前采用胰蛋白胨作为基础物来制备Ｐｎ培发肺炎¨引。Ｐｎ多糖疫苗可以有效预防Ｐｎ病发生。
养基，因胰蛋白胨多来源于动物（牛或猪），所以存目前的Ｐｎ多糖疫苗是大罐培养的Ｐｎ经多级
在引入其他外源性病毒的安全隐患。国际生物制品行业发展的趋势要求，制备疫苗时尽量避免使用ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４２１１．２０１４，０１．００２
动物源性材料，以有效降低生物制品风险ＨＪ。我们作者单位：６１００６３成都生物制品研究所有限责任公司培养基搴尝试用大豆胨作为基础物来制备培养基对Ｐｎ进行（邓雪莲、毕俊虹），细菌性疫苗二室（颜熙熙、张锐），质量保证部（王大罐发酵，并与使用目前培养基培养的Ｐｎ进行比静）
通信作者：邓雪莲，Ｅｍａｉｌ：ｄｅｎｇ＿ｘｕｅｌ３６＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ
较，以为疫苗生产过程中避免使用动物源性材料提
国匾生塑剑昌堂盘查！！！兰生！旦筮！！鲞箍！翅！堕』旦ｉ！垫垃！坐：坠！婴！盟！！！堡：！！！：！！：№：！
供依据。
胨，保留了大豆植物组织的高维生素和碳水化合１材料与方法物。检测结果显示，大豆蛋白胨的氨氮含量、总氮１．１材料
含量和消化系数与胰蛋白胨相似，但总碳水化合物Ｉ．１．１菌株２、３、４、１０Ａ、１７Ｆ、１８Ｃ、１４、１ｌＡ、９Ｎ型
含量明显高于胰蛋白胨（表１）。
Ｐｎ均由成都公司提供。
表１大豆蛋白胨与胰蛋白胨成分比较
１．１．２
Ｐｎ培养基动物源性培养基（ＤＷ），主要
成分包括胰蛋白胨、Ｌ．色氨酸、Ｌ一半胱氨酸盐酸盐、Ｌ．酪氨酸、磷酸钾；植物源性培养基（ＺＷ），主要成分包括大豆蛋白胨、Ｌ一色氨酸、Ｌ一半胱氨酸盐酸盐、Ｌ．酪氨酸、磷酸钾，均由成都公司培养基室提供。注：８氨氮含量／总氮含量
１．１．３分光光度计７２２Ｓ可见分光光度计购自上海棱光技术有限公司。
２．２两种培养基培养的各型Ｐｎ浓度比较
１．２方法
大罐培养结束时检测Ｐｎ浓度的Ａ值显示，ＺＷ
１．２．１
Ｐｎ培养基的制备将Ｌ一色氨酸、Ｌ一半胱氨
培养的９个型Ｐｎ浓度（Ａ值）均明显高于ＤＷ培养
酸盐酸盐、Ｌ．酪氨酸、蛋白胨、磷酸钾混合、溶解、过（ｔ＝３．８５１，Ｐ＜０．０５）（表２），表明９个型Ｐｎ在ＺＷ滤制成Ｐｎ培养基。
中的生长情况均好于在目前使用的ＤＷ中的生长情
１．２．２
Ｐｎ培养基的检测采用甲醛滴定法检测
况。
Ｐｎ培养基的氨氮含量，按照《中华人民共和国药典》２．３各型Ｐｎ在两种培养基中的生长曲线比较
２０１０年版三部ⅥＢ凯氏定氮法检测培养基的总氮
在大罐培养过程中，定时检测Ｐｎ浓度，以培养含量‘５｜。
时间为横坐标、Ｐｎ浓度的Ａ值为纵坐标，绘制Ｐｎ生１．２．３
Ｐｎ大罐培养按照成都公司的２３价Ｐｎ多
长曲线。图１（ａ～ｉ）显示，在培养条件相同的情况糖疫苗生产工艺规程，分别采用ＤＷ和ＺＷ对下，采用ＺＷ培养的各型Ｐｎ的对数生长期均长于采２、３、４、１０Ａ、１７Ｆ、１８Ｃ、１４、１１Ａ、９Ｎ型Ｐｎ进行大罐用ＤＷ培养，培养结束时ＺＷ培养的各型Ｐｎ浓度培养。
（Ａ值）均高于ＤＷ培养。
１．２．４Ｐｎ生长浓度的检测用分光光度计于２．４两种培养基培养的各型Ｐｎ粗制多糖含量比较
６９４
ｎｍ处读取培养物的吸光度（Ａ）值，检测各型Ｐｎ
大罐培养结束后，对两种培养基培养的各型Ｐｎ的生长浓度。
粗制多糖进行称重计量显示，除３型Ｐｎ多糖外，采１．２．５
Ｐｎ多糖的粗提按照成都公司的２３价Ｐｎ
用ｚＷ培养的其余各型Ｐｎ粗制多糖含量均明显高
多糖疫苗生产工艺规程对培养的各型Ｐｎ进行分离于采用ＤＷ培养（ｔ＝３．８５３，Ｐ＜０．０５）（表３），ＺＷ
纯化，获得粗制的各型Ｐｎ多糖。用称重法计量粗
培养的各型Ｐｎ多糖粗提量比ＤＷ培养平均高约９制多糖的含量。
倍，表明采用ＺＷ培养可获得更多的Ｐｎ粗制多糖。
１．３统计学分析应用Ｅｘｃｅｌ统计软件进行￡检３讨论
验，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
研究显示，９个型Ｐｈ在ＤＷ和ＺＷ中的起始浓度
２结果
无明显差别，而且在适应期的生长时间和浓度也相似。
２．１
大豆蛋白胨与胰蛋白胨的检测结果比较
但在对数生长期，ＺＷ比ＤＷ更能促进各型ＰＩｌ生长，且
大豆蛋白胨是一种不含动物成分的植物蛋白
ＺＷ培养的Ｐｎ对数生长期明显长于ＤＷ培养。
表２两种培养基培养的肺炎链球菌浓度比较
・６・
国匾生堑剑旦堂盘查！！！！生！旦筮！！鲞筮！翅！！！』旦ｉ！！！ｇ生坐：￡！！型！型垫！！：！！！：１２：塑！：１
８０７．Ｏ６．０５０
７．０６．０５．０
５．Ｏ４．５４．０３．５
趔４．０
、
ｊ型４．０
飞３．０
２．０１．００．０
０．０
１．０
２．０
３．０
４．０
５．０
６．０
０．０
２．０
４
３．０２．０１．００．０
鬻薹；暑
５１．Ｏ０．５０Ｏ
１
０６０８．０００２．０
４．０６．０８．０１０．０
培养时间／ｈ２型肺炎链球菌
（ａ）
１０．０９．０８Ｏ７Ｏ
３．５３．０２．５２．０
１５
培养时间／ｈ３型肺炎链球菌
（ｂ）
５．０
培养时间／ｈ４型肺炎链球菌
（ｃ）
描
３
５
鞋３
３０２Ｏ１０００
ｊ型独
弋２．０
１．００．５
Ｏ
浠
０．５Ｏ．０
００
２．０
４
０
０
６．０
８０
０．０２．０４．０６．０８．０
培养时间／ｈ
１
１Ａ型肺炎链球菌
４５
培养时间／ｈｌ４型肺炎链球菌
（ｆ）
１２・Ｏ
１００
４．０
３５
８．０３．Ｏ
姆６．ｏ
４．０２・ＯＯ．Ｏ
０．０
１．０
２０
３．０
４０
５０
划
飞
２５２．０１５
１．Ｏ
Ｏ５
Ｏ．Ｏ０．０
２．０
４
０
６．０
８．０
培养时Ｉ百］／ｈ１７Ｆ型肺炎链球菌
（ｇ）
注：ＤＷ：动物源性培养基；ＺＷ：植物源性培养基
培养时ＩⅦ］／ｈ１８Ｃ型肺炎链球菌
（ｈ）
培养时Ｉｂ］／ｈ９Ｎ型肺炎链球菌
（ｉ）
图１各型肺炎链球菌在动物源性和植物源性培养中的生长曲线
表３两种培养基培养的各型肺炎链球菌的粗制多糖含量比较
表明采用ｚｗ培养可获得更多的Ｐｎ粗制多糖，这为Ｐｎ培养基的进一步改良提供了依据。
在２３价Ｐｎ多糖疫苗生产中采用ＺＷ不仅是国际生物制品行业发展的必然趋势，也是降低生物制品风险的有效保障。我们相信，不久的将来一定能开发出安全有效的培养基用于各种疫苗的生产。
参考文献
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注：Ｐｎ：肺炎链球菌；ＤＷ：动物源性培养基；ＺＷ：植物源性培养基
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细菌荚膜多在生长后期形成，细菌生长期的延长可有助于获得更多的荚膜多糖。在此项研究中，除３型Ｐｎ多糖外，采用ＺＷ培养的其余各型Ｐｎ的粗制多糖含量均明显高于采用ＤＷ培养，ＺＷ培养的各型Ｐｎ的多糖粗提量比ＤＷ培养平均高约９倍，
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医疗器械产品安全性思考［Ｊ］．中国修复重建外科杂志，２００６，２０（１１）：１１３８—１１４４．
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北京：中国医药科技出版社，２０１０：附录３４．
（收稿日期：２０１３．０９－２２）
植物蛋白胨在肺炎链球菌培养基中的应用
作者：作者单位：
邓雪莲， 颜熙熙， 张锐， 王静， 毕俊虹， Deng Xuelian， Yan Xixi， Zhang Rui， Wang Jing， BiJunhong
邓雪莲,毕俊虹,Deng Xuelian,Bi Junhong(610063,成都生物制品研究所有限责任公司培养基室)， 颜熙熙,张锐,Yan Xixi,Zhang Rui(610063,成都生物制品研究所有限责任公司细菌性疫苗二室)， 王静,WangJing(610063,成都生物制品研究所有限责任公司质量保证部)国际生物制品学杂志
International Journal of Biologicals2014,37(1)1次
刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
参考文献(5条)
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4.史新立,谭芳奕,王召旭,奚廷斐,解慧琪,杨志明,戴建武 疯牛病病原体研究及动物源性医疗器械产品安全性思考[期刊论文]-中国修复重建外科杂志 2006(11)
5.国家药典委员会 中华人民共和国药典2010年版三部 2010
引用本文格式：邓雪莲.颜熙熙.张锐.王静.毕俊虹.Deng Xuelian.Yan Xixi.Zhang Rui.Wang Jing.Bi Junhong 植物蛋白胨在肺炎链球菌培养基中的应用[期刊论文]-国际生物制品学杂志 2014(1)