课题1菊花的组织培养
一、植物组织培养的相关概念和基本过程
1、(1)细胞全能性的表达:________的植物组织或细胞,在一定的____________、________和________________的作用下,发育成完整植株的过程。
(2)细胞分化:在植物的________过程中,细胞在________、________和____________上都会出现________的差异,形成这些差异的过程叫做细胞分化。
(3)植物组织培养的基本过程
离体的植物器官、组织或细胞(又叫________)――→愈伤组织――→胚状体、丛芽等
生长 ――→新个体
①愈伤组织的特点:细胞________________,是一群________________的呈________________的薄壁细胞。
②脱分化(去分化) :由____________的植物组织或细胞产生____________的过程。 ③再分化:由________________________重新分化成根或芽等器官的过程。
(4)条件:________的植物组织或细胞,在一定的________、________和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性,发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做________。
2.影响植物组织培养的因素
(1)培养材料的影响:不同的植物组织,培养的难易程度____________。对于同一种植物材料,材料的________、________________等也会影响实验结果。因此菊花的组织培养,一般选择________________的茎________部________的侧枝。
(2)营养物质的影响:常用的________培养基,主要成分包括____________、____________、________以及蔗糖等。其中____________和____________提供植物细胞所必需的无机盐;________提供碳源,维持细胞渗透压。
(3)植物激素的影响:MS 培养基常需添加植物激素。其中________和____________是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素,这两种激素的________、________________以及____________等,都会影响实验结果。
(4)环境因素的影响:________、________、________等条件也能影响植物组织培养。
类、培养基的营养条件、植物激素的种类和比例以及适宜的PH 、温度等。
二、实验操作过程:
1. 制备
实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备
(1)配制各种母液。
配制母液时,大量元素浓缩__________ ,微量元素浓缩__________ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照 的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时,需要根据各种母液的浓缩倍数,计算用量。
(2)配制培养基。
配制1LMS 培养基时,将称量好的琼脂加入800mL 蒸馏水,加热熔化,然后加入蔗糖30g, 依次加入母液,定容至1000mL 。__________,然后分装到锥形瓶中,每瓶分装__________。
(3)灭菌。采取的灭菌方法是 。
【思考】与肉汤培养基相比,MS 培养基有何特点?
肉汤培养基以 为主,MS 培养基则需提供大量 。
2.外植体
选取菊花茎段时,要取 ____________________。
无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料(外植体)的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时,一方面要考虑_______________;另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植物材料,甚至不同器官要区别对待。一般情况下,细菌污染可能是由接种人员造成的,真菌污染可能是_________灭菌不当。
①过程
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2~3次,持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1~2min →无菌水中至少清洗3次
3、接种
接种前,用体积分数70%的酒精将工作台擦拭,然后点燃酒精灯。
所有的接种操作必须在 进行,并且每次使用器械后,都要用火焰灼烧灭菌 插入外植体时 朝上,每个锥形瓶接种 个外植体。
4、培养
接种后的锥形瓶最好放在_________中培养。培养期间定期 ,保持适宜的 和 。
5、移栽
打开封口膜,在培养间生长几日;然后用流水清洗根部培养基,将幼苗移植到 等环境中生活一段时间,进行壮苗。最后进行露天栽培。
6、栽培
附:一般来说,容易进行__________的植物,也容易进行组织培养。