血常规检验
一、【检验方法】： KX —21血细胞分析仪
二、【原理及意义】：
（一）Hb
1、原理：
红细胞被溶血素溶解，释放出血红蛋白，血红蛋白被SLS 的亲水性的烷基部分所改变，由亚铁血红蛋白形态转变为高铁血红蛋白形态，形成SLS-Hb 的正铁血红蛋白化合物，在555nm 处有吸收峰，通过仪器内部的比色系统比色，可以测定Hb 的浓度。该方法利用了氧化血红蛋白法和氰化血红蛋白法的优点。一方面，SLS-Hb 法具有和氧化血红蛋白法一样的检测快速、无毒性成分的优点；另一方面也具有氰化血红蛋白法检测结果精确、重复性好的特点。
（二）RBC 、MCV 、MCH 、MCHC 、HCT 、RDW-CV 、RDW-SD
1、原理：
血液被稀释液稀释后，细胞一个一个通过狭缝，狭缝内外是有直流电的电解质环境，当细胞通过时会引起瞬时的电位变化，形成电脉冲，电脉冲的个数反应细胞的个数，大小反应细胞的大小。细胞体积在一定范围内划为红细胞；在某个范围划为血小板。同时通过仪器内部的数据分析系统换算出MCV 、MCH 、MCHC 、Hct 和统计学处理得出RDW-CV 、RDW-SD 分析数据。
（三）WBC 计数、及其分类
1、原理（电阻检测法）：
仪器吸取样本，用一定量的试剂和稀释液稀释后，在溶解剂(STROMATOLYZER-3WP )用下消除红细胞基质，让白细胞一个个依次通过计数池的微孔，利用细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。脉冲信号经放大、甄别后，微机处理数据得到其体积分布直方图。 淋巴细胞群为：35-90fl
中间细胞群为：90-160fl
粒细胞群为：160-300fl
三、【试剂品牌】：
稀释液： CELLPACK(PK-30L)
氯化钠6.38g/L
硼酸1.0g/L
四硼酸钠0.2g/L
EDTA-2K 0.2g/L
Hb 溶血素：SULFOLYSER (SLS-200A)
月桂洗硫酸钠 1.7g/L
白细胞溶解剂：STROMATOLYZER-3WP
清洗液：CELLCLEAN
STACCLEANER-SYS
次氯酸盐 5%
5、抗凝剂： KEDTA ·2HO （1.5-2.2mg 每毫升血液）
四、【仪器】：
KX —21N 血细胞分析仪
五、【操作步骤】：
㈠开机：
插上电源，打开 KX —21血细胞分析仪电源开关
仪器进入自动检测系统，自动检测各系统参数，同时测定本底参数。
当仪器显示窗口出现“Ready No:1“，说明仪器处于待测标本状态，可以正常测定血常规标本。
打开电脑和打印机，连接数据接口。
㈡关机：
仪器使用完毕，按“Shut Down”键。
将仪器测试针插入专用清洗液中，按开始键，当停止吸液时移去清洗液。自动血细胞计数仪进入自动冲洗状态，当自动血细胞仪显示窗口出现“Turn Power OFF”时可以安全关机，关闭仪器开关，关闭电脑。
㈢血细胞分析仪的保养（每周一次）
按“Select ”键，用上下移动键选择Maintenance 项，按“ENTER ”键。
再键“上下”移动键选择“Rinsing ”项，按“ENTER ”键。
在“RBC ”和“WBC ”计数池中各加1毫升专用清洁液，按“1”键
仪器自动清洁保养，全过程约需5分钟。
仪器表面需经常擦洗，保持仪器整体清洁。
㈣每日质控
在每天样本检测前，取质控品及临检中心质控品进行检测，并做好登记。若检测结果均在范围内，则可进行样本检测，若有失控出现，则需重新定标。
六、【参考范围】：
(1)白细胞(WBC)计数：成人(4 –10) ×109/L
儿童(5 -12) ×109/L
新生儿(15-20) ×109/L
(2)白细胞分类(成人) ：中性粒细胞 50-70%
淋巴细胞 20-40%
嗜酸性粒细胞 0.5-5%
嗜碱性粒细胞 0-1%
单核细胞 3-8%
2．红细胞(RBC)：男(4-5.5) ×1012/L
女(3.5-5) ×1012/L
新生儿(6-7) ×1012/L
血红蛋白(HGB)：男120-160g/L
女110-150g/L
新生儿170-200g/L
4．血小板(PLT)：(100-300) ×109/L
5．血球压积(HCT)：男0.42-0.49 L/L
女0.37-0.43 L/L
6．平均红细胞体积(MCV)：82-95fl
MCV （fl ）=
每升血液中血细胞比容（L/L）×1015
每升血液中红细胞总数
7．平均红细胞血红蛋白含量(MCH)：27-31pg
MCH （g/L）=
每升血液中血红蛋白浓度（g/L）
每升血液中红细胞总数
平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)：320-360g/L
MCHC （g/L）=
每升血液中血红蛋白浓度（g/L）
升血液中血细胞比容（L/L）
9．RDW-CV 、RDW-SD ： RDW-CV ：11.6%-14.0%；
RDW-SD ：39.0-46.0fL 。
10．PDW （15.05-18.1）%
MPV(9.4-12.5)fl；
P-LCR(13-43)％。
七、【临床意义】：
1．白细胞
（1）白细胞计数
①生理性增加新生儿、运动、饭后、冷水浴后、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、阵发性心动过速、阳光或紫外光照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。
②病理性增加类白血病、白血病、急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单核细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、组织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代谢性酸中毒、过敏等。
③减少伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布鲁杆菌热、流感、麻疹、风疹、革登热、传染性肝炎（亦可增多）、疟疾、过敏性休克、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、败血症、重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。恶性贫血、非白细胞性贫血、再生障碍性贫血、脾功能亢进、戈谢病、Felty 综合症、Che^diak-Higashi综合症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。
（2）白细胞分类计数：见下表
各种白细胞增多、减少的临床意义
细胞类别
增多
减少
中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
淋巴细胞
单核细胞
类白血病、白血病、化脓性细胞感染、溶血性贫血、急性出血、急性溶血、手术后、恶性肿瘤、组织损伤、皮肤病、真性红细胞增多症、脾切除术后。
参见嗜酸性粒细胞计数
慢粒、何杰金病、癌转移、铅和铋中毒等。
百日咳、传染性单核细胞增多症、淋巴细胞性白血病、传染淋巴细胞增多症、病毒性肝炎、弓形虫病
单核细胞性白血病、系统性红斑狼疮、亚急性细菌性心内膜炎、活动性结核、急性感染恢复期、原虫感染
伤寒、副伤寒、流感、麻疹、再生障碍性贫血、黑热病、病毒感染、原虫感染、病毒性肝炎、脾功能亢进、贫血、原发性中性粒细胞减少症、肝硬化
急性感染、粟粒性结核、晚期肿瘤、艾滋病、伴T 淋巴细胞减少的免性缺陷
使用皮质类固醇激素、再生障碍性贫血、多毛细胞白血病.
2．红细胞(RBC)：
①生理性减少见于妊娠中后期、6个月至2岁的婴儿等。
②病理性减少造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各种贫血。 ③相对性增多主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、大面积烧伤、吸烟、高血压、肥胖等。
④代偿性增多主要见于缺氧、新生儿、高原环境、CO 中毒、严重肺气肿、肺源性心脏病、先天性心脏病、心衰等。
⑤绝对性增多克隆性真性红细胞增多；非隆性红细胞增多，与促红细胞生成素产生过多有关，见于肾癌、肝细胞癌、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、肾移植、小脑血管瘤、子宫肌瘤。
3、血红蛋白(Hb)：
生理性增加：新生儿、高原居住者。
病理性增加：真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症（如先天性青紫性心脏病、慢性肺性疾病、脱水）。
减少：各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血。
红细胞比积(HCT) ：与红细胞计数、血红蛋白测定的意义类同。
血小板(PLT)：
（1）生理性正常人血小板在一天内可有6%-10%变化；表现为早晨低，午后较高；春季低，冬季略高；平原较低，高原较高；静脉血比毛细血管血高10%；月经前低，后升高；妊娠中晚期升高，分娩后减低；运动后升高，休息后恢复。
（2）病理性
减少：除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因。常见疾病有：①、血小板生成障碍，如急性白血病、再生障碍性贫血；②、血小板破坏过多，如ITP 、脾功能亢进，系统性红斑狼疮；③、血小板消耗过多，如DIC 、血栓性血小板减少性紫癜。
增多（血小板大于400×109/L）：①、骨髓增生性疾病：慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症；②、原发性血小板增多症；③、急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染；④、脾切除手术后。
6．MCV 、MCH 、MCHC
主要用于贫血的形态学分类，见下表:
贫血的形态学分类
MCV （fL ）
MCH （pg ）
MCHC （g/L）
大红细胞性贫血
正红细胞性贫血
单纯小细胞性贫血
小细胞低色素性贫血
100-160
80-100
72-80
50-80
35-50
27-35
21-26
12-30
310-370
310-370
300-370
240-300
7．RDW-CV 、RDW-SD ：
(1)用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW 增大，经治疗后可恢复正常。
(2)用于小细胞低色素性贫血的鉴别，缺铁性贫血时RDW 增大，而轻型珠蛋白生成障碍性贫血时RDW 正常。
(3)RDW与MCV 结合可将贫血分为6种。①小细胞均一性：MCV 下降，RDW 正常，如轻型珠蛋白生成障碍性贫血。②小细胞不均一性：MCV 下降，RDW 增大，如缺铁性贫血。③正常细胞均一性：MCV 、RDW 均正常，如某些慢性疾病。④正常细胞不均一性：MCV 正常，RDW 增大，如早期缺铁性贫血。⑤大细胞均一性：MCV 增大，RDW 正常，如再生障碍性贫血。⑥大细胞不均一性：MCV 、RDW 均增大，如巨幼细胞性贫血。
8．MPV 、PDW 、P-LCR ：
①MPV 其临床意义要结合PLT 的变化才有价值。①、鉴别血小板减少的原因：当骨髓造血功能损伤致血小板减少时，MPV 减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血小板减少，MPV 增大；血小板分布异常致血小板减少时，MPC 正常。②、MPV 增大可作为骨髓造血功能恢复的较早期指征：骨髓造血功能衰竭时，MPV 与PLT 同时持续下降；造血功能抑制越严重，MPV 越小；当造血功能恢复时，MPV 增大常先于PLT 升高。③、其它：MPV 增大见于骨髓纤维化、ITP 、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、镰刀细胞性贫血；MPV 减小见于脾亢、化疗后、AA 、巨幼细胞性贫血等。
②PDW 是反映血小板体积大小的异质性参数，增大见于急淋化疗后、巨幼细胞性贫血、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、血栓性疾病等；可用于鉴别原发性血小板增多症和反应性血小板增多症，前者PDW 增加，后者PDW 正常。
③P-LCR 代表血小板计数中体积>12fL的血小板的比值或数量，有助于识别堆集血小板、大血小板和细胞碎片，并可监测骨髓的造血功能。
八、【标本采集】：
随机采取病人静脉血，用40g/L EDTA-K2 抗凝(50ul抗凝1ml 血，相当于2mgEDTAK2/1ml血) 。
九、【注意事项】：
1、血细胞计数应用EDTA-K2为抗凝剂，用量为EDTA-K2*2H2O1.5—2.0mg 可抗凝1ml 血，不能用肝素或枸橼酸钠等抗凝剂。
2、采集后在室温中贮存不应超出6h ；如需制用血涂片应在2h 内完成。
3、测定前抗凝血应充混匀，任何小凝块或血小板聚集均会影响血细胞计数。
4、注意病理因素对血液分析仪使用的影响，特别是各系统的报警提示。如是否有大血小板对血小板计数的影响；有无有核红细胞对白细胞计数的影响等等。
5、如有冷凝集现象，将血置37℃水浴箱10min 后立即测试。
十、【质量控制】：
每日工作开始应先做sysmex 质控或临床检验中心的全血质控品，。
出现失控，应校正后并重做质控，直至符合质控要求。
按要求做好仪器校正和仪器对比工作。
做好质控、失控和校正登记。
十一、【报告复查】：对以下情况的样本进行复查(仪器及手工) ；
(1) 白细胞低于3.0×109/L；
(2) 红细胞数与血红蛋白明显不符；
(3) 血小板低于50×109/L；
(4) 白细胞分类时，中间细胞>15%，以及机器未能分出的样本需手工分类。
白细胞计数:
原理：血液经稀酸溶液稀释后，红细胞被破坏，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数，求得每微升中的白细胞数。
试剂：
冰醋酸 10ml
蒸馏水 加至500ml
10g/L美蓝 3滴
器材：20微升吸管，血细胞计数板，显微镜。
操作：加计数试剂0.38ml 于小试管内，取血20微升吹入试剂，混匀。静置1-2分钟。低倍计数，计数4角得4大方格，计数总数乘以50即为白细胞/微升。
血小板计数:
原理：血液用血小板计数试剂稀释后，在显微镜下计数。
试剂
草酸铵稀释液草酸铵1.0g ，乙二胺四乙酸二钠0.014g,40%甲醛溶液0.1ml 加水至100ml ，加亚甲蓝少许，过滤后置冰箱备用。
许汝和稀释液尿素9g ，乙二胺四乙酸二钠0.5g ，巴比妥钠0.3g ，加蒸馏水水至100ml ，过滤后置冰箱备用。
Barr 稀释液白皂素0.25g ，枸橼酸钠3.5g ，煌焦油蓝0.1g ，40%甲醛溶液1.0ml ，加水至100ml ，过滤后置冰箱备用。
操作
选上述任一试剂（本科室用2液），每管加0.38ml ，加入全血20微升，充分混匀。
用改良牛鲍计数板，将血液稀释液充池后，置于有滤纸得培养皿内，放置至少10min ，待血小板沉降后计数。
计数中央大方格内5个中方格得血小板数，其结果乘1000，即得每微升血液中血小板数。 手工白细胞分类计数:
㈠、原理
把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。 ㈡、试剂
瑞姬氏复合染色液
Ⅰ液：取瑞氏染粉1g 、姬姆萨染粉0.3g ，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml 。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，以后存放一周即能使用。 Ⅱ液：pH 6.4-6.8磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾（无水） 6.64g
磷酸二氢钠（无水） 2.56g
加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH ，加水至1000ml
㈢、操作
采血后推制厚薄适宜的血膜片应呈舌状，头、体、尾清晰可分。
推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中促干，以免细胞变形缩小。
染色。平置玻片于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速盖满血膜，约1分钟后，滴加缓冲液5-10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，5-1分钟后用冲去染液，待干。 选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率）。