蛋白质含量检测
一. 原理
蛋白质含有两个以上的肽键，可发生双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色络合物，在540mm 处有最大吸收。且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。 二. 试验所需
1. 双缩脲试剂：取CuSO 4·5H 20(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水溶解，再加2.5mol ／L NaOH 溶液300ml ，KI 1.0g ，然后加水至1000ml 。棕色瓶中避光保存。长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。
2. 标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA ）或标准酪蛋白，配制成10g/L的标准蛋白溶液，可用BSA 浓度1g/L的A 280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H 2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05mol/L NaOH 配制 三. 试验步骤
1. 取试管7支，编号，按下表操作：
2. 混匀，37℃水浴20分钟，冷却至室温，在分光光度计波长540nm 处，用空白管调零，读取各管吸光度值。1～5为标准曲线管，测得吸光度后，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。以测定管的吸光度，在标准曲线上求得蛋白质浓度。 四. 注意事项
1．双缩脲试剂中，加入酒石酸钾钠，Cu 2+形成稳定的络合铜离子，以防止CuSO 4·5H 20不稳定形成Cu(OH)2沉淀。酒石酸钾钠与CuSO 4·5H 20之比不低于3∶1，加入KI 作为抗氧化试剂。
2．双缩脲试剂要封闭贮存，防止吸收空气中的二氧化碳。 3．本法各种蛋白质的显色程度基本相同，重复性好，几乎不受温度影响，唯一缺点是灵敏度较低。
4．黄疸血清、严重溶血对本法有明显干扰。
5. 对含脂肪高的样品溶液与双缩脲试剂混合后，若有雾状沉淀，需让其静置2h 以上再离心，取其清液比色。