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微柱凝胶抗人球蛋白法sop

03/05

微柱凝胶抗人球蛋白法

1. 目的

为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用,保证检测结果准确及临床输血安全有效,依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。

2. 适用范围

适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。

3. 职责

医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。

4. 原理

红细胞血型抗原与不完全抗体(IgG ),在抗人球蛋白的桥梁作用下,经一定的离心力,产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体(IgM )直接产生的特异性免疫凝集复合物,被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中,判为阳性结果,表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体;红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部,即判断为阴性反应,表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。

5. 所需设备和试剂

普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡

6. 检测环境条件

室湿应控制在18~27℃,湿度应保持30%~70%。

7. 操作步骤

7.1先将供(受)血标本制备0.5%红细胞低离子介质(LIM )悬液。

7.2撕开卡的封膜,于反应胶中主(次)侧管加供(受)者 0.5% 红细胞LIM 悬液100μl ,加入受(供)血者血浆或血清25μl (或50μl )。

7.3将检测卡37℃孵育15min 取出,置离心机1800r/min离心1min 或2500r/min离心1min 。

7.4取出,判定结果,结果判定标准按下:

阳性

4+ 表示RBC 绝大部份凝聚于凝胶表层

3+ 表示RBC 多数凝聚于凝胶表层,少数RBC 凝集颗粒悬浮于近胶表层 2+ 表示部份RBC 沉积于胶底,部分RBC 凝集颗粒悬浮于凝胶中

1+ 表示RBC 多数沉积于胶底,可见少数RBC 凝集颗粒悬浮于凝胶中 ± 表示RBC 绝大多数沉积于胶底,极少数RCB 凝集颗粒悬浮于近胶底

dcp 表示混合凝集外观,部份RBC 凝集颗粒集结于凝胶表层,部分RBC 沉于胶底 PH 表示部分溶血,凝胶管中液体呈清澈透明红色,凝胶中有残留RBC H 表示完全溶血,凝胶管中液体呈清澈透明红色,凝胶中无RBC

阴性

- 表示RBC 全部沉积于胶底

检验结果的解释:

阳性结果,表示受(供)血者血浆或血清中含供(受)血者红细胞血型抗原相应的抗体(不完全抗体IgG 或完全抗体IgM ),供受血者血液不相容。 阴性结果,表示供受血者血液相容。

8. 质量控制

8.1微柱凝胶试剂卡在有效期内使用,每批试剂卡在使用前用已知阴、阳性对照确认其有效性。

8.2试剂质量控制方法

8.2.1即作阴、阳性对照试验:撕开检测卡的封膜,于2个反应腔中分别加入已致敏IgG 抗D 的1%O型RhD(+)红细胞LIM 悬液50μl 、健康者1%O型RhD(+)红细胞LIM 悬液50μl 。

8.2.2将检测卡于离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min 。

8.2.3取出,结果判定同7.4

9. 注意事项

9.1检测卡若在冰箱储存,使用前须放置实验室平衡至室温。

9.2检测卡试验前,应3000r/min离心1min ,正立放置待用。

9.3如因运输过程产生的气泡,可将检测卡放置在漩涡震荡器上震荡,使气泡漂移至胶面为止,3000r/min离心2min 。

9.4细菌污染、纤维蛋白析出、抗凝不佳的血,可产生假阳性。

9.5离心速度过快,时间过长,试剂失效等因素均可导致假阴性。


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