实验九、DNA的限制性内切酶酶切
一、实验目的
1、了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程。
2、 学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术。
二、实验原理
EcoR I限制性内切酶的识别与切割顺序为：
5’……G↓AATTC……3’
3’……CTTAA↑G……5’
Xho I限制性内切酶的识别与切割顺序为：
5’……C↓TCGAG……3’
3’……TAGCT↑C……5’
三、实验材料
1、仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。
2、1.5ml离心管、移液枪枪头等。
3、DNA样品：上一个实验获得的质粒DNA
4、限制性内切酶Xho I和EcoR I（Takara）
四、实验步骤
酶切体系：
质粒DNA 5ul
EcoRⅠ 1ul
Xhol Ⅰ 1ul
2×Buffer H 2ul
Sw 11ul
Total 20ul
1、用微量移液枪（20微升）依次吸取SW、10倍酶切缓冲液、DNA、EcoR I、Xhol I。
2、盖紧上述两个1.5ml离心管的盖子，在振荡器上充分混匀2秒钟，立即于离心机内离心一下，以将管壁上的液体集中于管底。
3、将离心管放置37℃水浴锅中反应3小时。在酶切反应的同时，制备1.0%的琼脂糖凝胶，并准备好电泳装置。
五、实验结果
很明显17组由于样品里的目的片段DNA量太少，所以没有检测到。
观察其他组的结果可知，酶切后产生2条条带，由于质粒DNA是一种环状闭合双链DNA，这与质粒DNA被两不同的限制性核酸内切酶酶切后的DNA数符合。