试剂盒使用说明 - 范文中心

试剂盒使用说明

11/07

* 质粒小量提取试剂盒

产品说明:

■本产品采用经典的硅胶膜及碱裂法技术,硅胶膜柱可以在高盐、低pH 值情况下高效可逆的结合DNA, 而蛋白及其它杂质不被结合而被除去, 被结合的核酸在低盐、高pH 值情况下可被洗脱出来. 该试剂盒具有高效、快速、方便之特点,全套操作只需半个小时便可完成。使用本试剂盒可从1~5 ml的过夜培养的菌液中纯化得到1~40μg 的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8~2.0) ,此质粒DNA 可直接用于DNA 序列分析以及各种酶促反应等。 试剂盒组成:

产品编号

GS001-1

试剂盒组成 纯化次数

RNaseA (10mg/ml) 溶液Ⅰ 溶液Ⅱ 溶液Ⅲ 溶液PB 溶液W

溶液Eluent DNA 纯化柱

50次 150μl 15ml 15ml 20ml 30ml 30ml 5ml 50个

GS001-2 100次 300μl 30ml 30ml 40ml 50ml 2×30ml 10ml 100个

GS001-3 200次 600μl 60ml 60ml 80ml 100ml 3×40ml 20ml 200个

溶液W 初次使用前用无水乙醇按1:1.5稀释,即含60%乙醇。

用途:提取用于酶切、转化、测序、PCR 等试验用质粒。 保存:

初次使用本试剂盒时,请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中,均匀混合后4℃保存。溶液Ⅱ:室温保存,若出现沉淀,请于37℃保温溶解,待恢复至室温后使用。其他试剂:室温保存。 操作步骤:

1. 用1.5 ml离心管收集1.5-5ml 菌液,12000rpm 离心60秒,弃上清。 (应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量)

2. 加入250µl溶液Ⅰ/RNase A混合液,漩涡振荡使菌液完全重新悬浮。

(菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的, 为使RNA 被RNase A充分降解, 让悬浮菌液静置1-2分钟 3. 250µl溶液Ⅱ,温和反复颠倒混匀4-10次, 室温放置1-2分钟, 以获得澄清的裂解液。 (不可剧烈混和, 否则会使染色体DNA 断裂.)

4. 加入350µl溶液Ⅲ,反复颠倒混匀4-6次, 12000rpm离心10分钟。 5. 将上清置于DNA 纯化柱中,静置1-2分钟。 6. 12000rpm 离心60秒,弃虑液。

(注:此时DNA 被吸附于DNA 纯化柱中的硅胶膜上。)

7. 加入500µl 溶液PB,12000rpm 离心60秒,弃虑液。

注:目的是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱, 得到高质量的DNA 。 如果所需的DNA 质量要求不是很高此步可以省去. 8. 加入500µl溶液W,12000rpm 离心60秒,弃虑液。 9. 可选做步骤:重复步骤8, 再用500ul 溶液W 洗涤柱子一次. 10.12000rpm 再次离心60秒,甩干剩余液体。 主要是去除残余酒精,以利于DNA 溶解。

11. 将DNA 纯化柱置于新的离心管中,加入适量(50-100µl)Eluent (≥60℃预热)室温放置2分钟 12000rpm离心60秒,管底即为质粒DNA 。

注:溶液Eluent 可用无菌双蒸水代替,但其pH 需为8.0-8.5, 加入体积视质粒拷贝数多少、 用户对质粒浓度要求而定。60℃预热,目的是提高产量,温度不需很准,50℃-65℃均可。

* DNA凝胶回收试剂盒

产品说明:

本试剂盒所带DNA 纯化柱,具有在高盐、低pH 值情况下吸附DNA, 低盐、高pH 值情况下释放DNA 的性质. 该试剂盒能从各个等级的琼脂糖凝胶中很好的回收50bp-40kb 的DNA 带, 回收率高达85%.目的DNA 带从凝胶上切下来后,经特定的溶液BD 处理,可将含目的带的琼脂糖溶解完全, 然后转移到一个DNA 回收纯化柱上,经过溶液PE 快速的洗涤步骤后,DNA 便可用去离子水(或低盐缓冲液)洗脱出来,回收产物可用于PCR 、连接、测序、限制性酶切等应用。该试剂盒还适用于PCR 产物纯化、酶切产物回收及基因组DNA 纯化。 试剂盒组成: 产品编号

GS002-1

试剂盒组成 纯化次数 溶液BD 溶液PE 溶液Eluent DNA 纯化柱

50次 20ml 15ml 2.5ml 50个

GS002-2 100次 40ml 2×15ml 5.0ml 100个

GS002-3 200次 80ml 3×20ml 10ml 200个

溶液PE 初次使用前用无水乙醇按1:4稀释,即含80%乙醇。

保存条件:室温保存大于24个月。 产品特点:

快速――15min内从凝胶中回收DNA

可靠――最适宜的缓冲液系统保证了高纯度的DNA 安全――无有机溶液抽提

质量――纯净的DNA 适用于多种下游应用 可以高效的回收小片段DNA. 操作步骤:

1. 通过把切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶装在1.5ml 小离心管中,称其重量近似地确定其体积,每100mg 琼脂

糖凝胶相当于100µl体积, 称量每次切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶加入等体积的溶液BD 。 PCR产物纯化、酶切产物回收及基因组DNA 则加入等体积的溶液BD 混匀,进入步骤3. 2. 55℃-65℃水浴7-10分钟,直至胶完全融化,期间振荡3次,琼脂糖必须完全融化。

如果体积大于500µl,可适当增加融胶时间,若此时溶液变红,可加10µl 3M NaAC (pH5.0)。

3. 将溶液置于DNA 纯化柱中,静置2分钟,12,000rpm 离心60秒,若一次加不完,可分两次离心, 弃虑液。 4. 加入500 µl溶液PE (初次使用前用无水乙醇按1:4稀释)于离心柱中12,000rpm, 离心60秒,弃虑液.

5. 用溶液PE (初次使用前用无水乙醇按1:4稀释)500 µl再洗一遍,12,000rpm 离心60秒。 12,000rpm 再次离心2分钟,以甩干剩余液体。(注:此步对获得较好的DNA 产量十分重要) 6. 将离心柱置于新的离心管中,加入60℃预热的溶液Eluent 25-35µl于纯化柱中(硅胶膜中央), 静置2分钟,12,000rpm 离心60秒,管底即为回收的DNA 。 7. 将DNA 贮存于-20℃。

* PCR产物及DNA 片段纯化试剂盒

产品说明:

本试剂盒所带DNA 纯化柱,具有在高盐、低pH 值情况下吸附DNA, 低盐、高pH 值情况下释放DNA 的性质。该试剂盒能很好的回收50bp-40kb 的DNA 片段, 回收率高达85%. PCR 产物或酶切产物经特定的BD 溶液处理,然后转移到一个DNA 回收纯化柱上,经过离心吸附, 然后经溶液PE 快速的洗涤步骤后,DNA 便可用去离子水(或低盐缓冲液)洗脱出来,回收产物可用于PCR 、连接、测序、限制性酶切等应用。该试剂盒可从PCR 扩增体系、酶切和其它水溶液体系中快速回收纯化DNA, 有效去除PCR 反应体系中的dNTPs 、引物和聚合酶. 该试剂盒可以高效的回收小片段DNA (50bp 、100bp ). 该试剂盒还可以用于从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段。 试剂盒组成: 产品编号 试剂盒组成 纯化次数 溶液BD 溶液PE 溶液Eluent DNA 纯化柱 说明书

GS010-1

GS010-2

GS010-3

50次 20ml 15ml 2.5ml 50个 1

100次 40ml 2×15ml 5.0ml 100个 1

200次 80ml 3×20ml 10ml 200个 1

溶液PE 初次使用前用无水乙醇按1:4稀释,即含80%乙醇。

保存条件:室温保存大于24个月。 产品特点:

·快速――10min内从PCR 产物中回收DNA

·可靠――最适宜的缓冲液系统保证了高纯度的DNA ·安全――无有机溶液抽提

·质量――纯净的DNA 适用于多种下游应用 ·可以高效的回收小片段DNA (50bp ). 注意事项:

1. 溶液PE 初次使用前请用无水乙醇按1:4稀释,即含80%乙醇。

2. 溶液Eluent (10 mM Tris/HCl , pH8.5)可用无菌双蒸水代替,但其pH 需为8.0-8.5, 加入体积视回收DNA 量

的多少及用户对浓度要求而定。60℃预热,目的是提高产量,温度不需很准,50℃-65℃均可。 操作步骤:

1. 确定PCR 反应产物体积,将PCR 产物转移至一个1.5ml 离心管中,加入等体积的BD 溶液, 旋涡混匀,

然后进入步骤2. (如果用于从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段则先进行步骤a 和步骤b 再进入步骤2) a. 通过把切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶装在1.5ml 小离心管中,称其重量近似地确定其体积,每100mg 琼脂糖凝胶相当于100µl体积, 称量每次切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶加入等体积的溶液BD 。

b. 55℃-65℃水浴7-10分钟,直至胶完全融化,期间振荡3次,琼脂糖必须完全融化。

如果体积大于500µl,可适当增加融胶时间,若此时溶液变红,可加10µl 3M NaAC (pH5.0)。 3. 将溶液置于DNA 纯化柱中,静置2分钟,12,000rpm 离心60秒.

4. 加入500 µl溶液PE (初次使用前用无水乙醇按1:4稀释)于离心柱中12,000rpm, 离心60秒,弃虑液.

5. 用溶液PE (初次使用前用无水乙醇按1:4稀释)500 µl再洗一遍,12,000rpm 离心60秒。 6. 12,000rpm 再次离心2分钟,以甩干剩余液体。(注:此步对获得较好的DNA 产量十分重要) 7. 将离心柱置于一新的离心管中,加入60℃预热的30-100µl溶液Eluent 于纯化柱中(硅胶膜中央), 静置2分钟,12,000rpm 离心60秒,管底即为回收的DNA 。 8. 将DNA 贮存于-20℃。

效果图

* Gzol Reagent(RNA提取试剂)

CatNo. GS004-1 50ml;CatNo. GS004-2 100ml 产品说明

■TRIzol是目前最常用的RNA 提取试剂. 采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA 原理,在短时间内提取高质量的总RNA 。

■方便从人、动物、植物和细菌组织提取总RNA ,可同时处理大量样本,提取的RNA 没有DNA 和蛋白的污染,可用于RT-PCR 、Northern Blot、Dot blot、Nuclease protection assays、cDNA 合成等下游应用。 保存

室温下可稳定保存1年,为保证试剂质量,建议保存在2-8℃的环境下。 实验所需试剂但未提供的物品 ★ 氯仿 ★异丙醇

★ 75%乙醇(用DEPC 处理过的水配制)

★ 无RNA 酶的水或0.5% SDS 溶液[调配无RNA 酶的水,将水加入无RNA 酶的玻璃瓶中,加入DEPC 至0.1% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。SDS 溶液必须用DEPC 处理过并经高压灭菌的水配制。

预防RNA 酶污染:

在抽提RNA 过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA 酶的污染。由于RNA 酶的活性很难完全抑制,预防其污染是十分必要的。在实际的操作中应遵循以下指南:

* 全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌,可能污染RNA 的抽提并成为RNA 酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。

* 使用灭菌的,一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA ,避免使用公共仪器所导致的RNA 酶交叉污染。例如,使用RNA 探针的实验室可能用RNA 酶A 或T1来降低滤纸上的背景,因而某些非一次性的物品(如自动吸管)可能富含RNA 酶。

* 在TRIzol 中,RNA 是隔离在RNA 酶污染之外的。而对样品的后续操作会要求用无RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C的烘箱中烘烤4小时。塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。

RNA 抽提操作步骤

注意:用TRIzol 抽提RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱 完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外,所有的操作应该在在15~30°C的条件下。

实验所需试剂但未提供的物品:

* 氯仿* 异丙醇

* 75%乙醇(用DEPC 处理过的水配制)

* 无RNA 酶的水或0.5% SDS 溶液[调配无RNA 酶的水,将水加入无RNA 酶的玻璃瓶中,加入DEPC 至0.1% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。SDS 溶液必须用DEPC 处理过并经高压灭菌的水配制。 1. 匀浆化作用 a. 组织

用glass 或强力匀浆器搅匀组织样品,每50~100mg组织加1ml 的TRIzol 。匀浆化时组织样品容积不能超过TRIzol 容积的10%。 b. 单层生长的细胞

直接往直径3.5 cm 的培养板中加入1ml 的TRIzol 溶解细胞,通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIzol 量(每10cm2加1ml )。当TRIzol 量不足时可导致抽提的RNA 中污染有DNA 。 c. 悬浮生长的细胞

通过离心来沉淀细胞。在TRIzol 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动

物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml 的TRIzol 。在加入TRIzol 前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA 降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。 可选方案:

当样品富含蛋白质,脂肪,多糖或是细胞外物质例如肌肉,脂肪组织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8°C的条件下以12,000×g的离心力离心10分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA ,而上层的超浮游物含有RNA 。在来自于脂肪组织的样品中,大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中,将清亮的匀浆溶液转移到一干净的试管中加入氯仿并继续进行下述的分离步骤。

2. 分离阶段

将匀浆样品在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。每1ml TRIzol加0.2ml 氯仿。盖紧样品管盖,用手用力摇晃试管15秒并将其在30°C下孵育2~3分钟。在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心15分钟。离心后混合物分成三层:下层苯酚-氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA 无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIzol 容量的60%。

3. RNA的沉淀

将水样层转移到一干净的试管中,如果希望分离DNA 和蛋白,有机层同样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA 。最初均化时的每1ml TRIzol对应0.5ml 异丙醇。将混合的样品在15 -30°C条件下孵育10分钟并在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心10分钟。RNA 沉淀在离心前通常不可见,形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。

4. RNA的漂洗

移去上层悬液。用75%的乙醇洗涤RNA 沉淀一次,每1ml 的TRIzol 至少加1ml 的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°C下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5分钟。

5. RNA的再溶解

在操作的最后,简单干燥RNA 沉淀(空气干燥或真空干燥5~10分钟)不要在真空管里离心干燥RNA 。尤为重要的是,不能让RNA 沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。

部分溶解的RNA 样品其A260/280比值

RNA 抽提注意事项:

1. 从少量的组织(1~10mg)或细胞(102~104)中分离RNA 样品:往组织或细胞中加入800µl TRIzol。待样品裂解后,加入氯仿并进行步骤2中的抽提操作。在用异丙醇沉淀RNA 之前,加入5~10μg 无RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用26号注射器抽吸两次以切断基因组DNA 。Glycogen 会留在水样层中并和RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制PCR 。 2. 在匀化后和加入氯仿之前,样品可以在–60~–70°C保存至少一个月。RNA 沉淀(步骤4,RNA 漂洗)溶于75%的乙醇在2~8°C至少可以保存一周,在–5~–20°C下至少可保存一年。

3. 台式离心机最大能达到2,600×g的离心力,如果将离心时间延长到30~60分钟可以满足步骤2和步骤3中的操作

疑难解答:

每1mg 组织或1×106培养细胞预期的RNA 产量

1. 肝和脾,6~10μg 。2. 肾,3~4μg 。3. 骨骼肌和脑组织,1~1.5μg 。4. 胎盘,1~4μg 。5. 上皮细胞(1×106 cultured cells),8~15μg 。6. 纤维母细胞(1×106 cultured cells),5~7μg 抽提得率低

1. 样品均化或裂解不完全。 2.终RNA 不完全再溶解。 A260/A280比率

1. 在分光光度计测量前用水而不是用TE 缓冲液稀释RNA 样品。低离子强度和低pH 溶液会增加280nm 处的光吸

收值。

2. 样品匀浆化时所加的TRIzol 量太少。 3. 匀浆化后样品没有在室温下放置5分钟。 4. 分离的水样层中污染有苯酚层。 5. 终RNA 没有完全溶解。 RNA 降解

1. 从动物体取下的组织没有立即进行抽提或冰冻保存。

2. 用于抽提的样品,或抽提的RNA 样品保存于–5~–20°C,而不是存放于–60~–70°C 。 3. 细胞经胰酶消化而分散。 4. 水溶液或试管污染有RNA 酶。

5. 用于琼脂糖凝胶电泳的福尔马林pH 低于3.5。 DNA 污染

1. 样品匀浆化时所加的TRIzol 量太少。

2. 用于抽提的样品包含有机溶媒(例如,乙醇,DMSO ),强缓冲液,或碱性溶液。 蛋白多糖和多糖污染

下述的对RNA 沉淀方法(步骤3)的改进能从抽提的RNA 中移去复合污染。以匀浆化时每1ml TRIzol 为例,在水样层中加入0.25ml 异丙醇后再加入0.25ml 的高盐溶液(0.8 M柠檬酸钠和1.2 M NaCl)。将终溶液混匀,离心并继续进行前述的抽提操作。改进后的沉淀法能有效地析出RNA 而多糖和蛋白多糖仍以可溶的的形式留在溶液中。对于含有大量多糖的植物,要抽提其RNA 将改进后的沉淀法和在最初匀浆化时多加一次离心(RNA抽提指南,可选方案) 合并使用是十分必要的。

* 总RNA 快速抽提试剂盒

适用范围:全血、骨髓、组织、细胞、体液

保存条件:室温,保质期2年。RB1液置4℃避光保存保质期更长。

性能介绍: 样本量 耗时 洗脱体积 产量 纯度 特点

全血、骨髓1-2ml ,培养细胞

3-10μg/ml全血,100-300μg/1×107细胞,1-6μg/ mg组织 OD260/OD280: 1.9-2.1

1. 特别设计针对1-2ml 全血的提取,无需淋巴细胞分离液离心,不丢失粒细胞,因此获得的RNA 产量增加一倍

2. 是替代Trizol 的升级产品,获得的RNA 产量与Trizol 提取相同,但酚和乙醇残留少,提取过程中被RNase 污染机会少,提取速度快

3. 使用Trizol 提取少量RNA 时,反复离心沉淀往往造成RNA 丢失,每次提取的得率不一。本试剂盒可以捕获少量RNA ,不同提取批次间变异小

RT-PCR ,表达芯片分析,构建cDNA 文库,RPA ,Northern Blot等

用途 试剂盒组成

GS005-1

品编号

试剂盒组成 RB1 RB2 洗液 洗脱液

内套柱,外套柱 钢网,平皿,研磨棒 说明书 操作流程

实验操作前请先认真阅读“注意事项” 1.样本预处理

(50次)

GS005-2 (200次)

50ml 200ml 20ml 80ml 15ml 3×20ml 10ml 10ml 50套 200套

需要时另配(提取组织RNA 时用)

1份

a .抗凝全血、骨髓:取1-2ml 放入离心管中,12,000rpm 离心2min ,吸取中间白膜层细胞100μl 至1.5ml

eppendorf 管中(吸取时用普通加样枪头口太小,剪去约5mm 尖即可。吸取的白膜层细胞中混有大量红细胞,不影响后继提取);

b .组织块:剪切成小块后放入平皿(置冰袋上预冷)中的钢网上,加入PBS 或生理盐水(约1ml/30mg组织),用研磨棒将组织研磨挤压过钢网,收集过网悬液,取100μl 放入eppendorf 管中;

c .培养细胞:悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清(>100μl/1×107细胞),充分吹打直至没有细胞团

块,取100μl 放入eppendorf 管中;贴壁细胞消化后处理同上。

d .体液及其它液体性样本:尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10ml ,3,000rpm 离心2min ,留下沉淀及约100μl 上清,充分震荡悬浮沉淀,取100μl 放入eppendorf 管中;

2.处理好的样本中,加入RB1液1ml ,充分颠倒混匀直至完全溶解,室温放置5min 。

3.加入氯仿200μl ,充分颠倒混匀1min ,成均一的乳糜状,离心5min 。

4.将上清液小心转移到RNase-free 的1.5ml eppendorf 里(离心分层后,可以吸取上层无色液体约为350µl,注意不要吸取任何中间层物质) 。

5.加入RB2液350μl ,充分颠倒混匀1min 。

6.将混匀后的液体吸入或直接倒入内套管,离心1min 。

7.弃去外套管中液体,内套管中加入500 μl 洗液,离心1min 。再重复此过程洗一次。

8.取出内套管,弃去外套管中液体,仍然套回内套管,不加洗液,离心1min 。

9.将内套管移入新的eppendorf 管中,在膜中央加入洗脱液(或pH>7.0的DEPC 处理水)25-50μl ,室温静置1min ,离心1min ,获得总RNA 。

注意事项

1. 重要提示:RB1具有强烈腐蚀性,操作时要戴手套和防护眼镜,最好在通风柜中进行,若不慎沾染,立即用大量清水冲洗,必要时到门诊处理。

2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm ,室温离心(有条件可4℃离心)。以eppendorf 5417离心机为例,12,000rpm =13,362g ,其它类型离心机转速应达到相近的g 数。

3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml 无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。氯仿自备。

4. 避免环境中RNA 酶污染,操作要戴手套,所有枪头和eppendorf 管以DEPC 水处理。

5. 血液抽取后应在4小时内提取RNA 。冻存的血液RNA 大部分丢失,不能用于提取。

6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25μl-50μl ,低于25μl 将不能保证充分浸润吸附膜。

7. 洗脱液pH

* 基因组DNA 快速提取试剂盒

适用范围:全血、骨髓、细胞、组织、体液

产品简介:

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸, 再以特异性结合DNA 的离心吸附柱吸附DNA, 通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份, 然后通过洗脱得到高纯度的基因组DNA. 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA ,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。本试剂盒可从1μl-200μl 全血中提取到3-35 μg DNA. 产品特点:

简单快速:30分钟内即可获得超纯的基因组DNA 。

超纯高质:获得的DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。

安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.

保存条件:室温,保质期2年。

试剂盒组成:

产品编号

GS003-1

试剂盒组成

纯化次数

溶液XY1

溶液XY2

漂洗液WP

溶液XY3

溶液Eluent

纯化柱 50次 100ml 35ml 30ml 15ml 5ml 50个 GS003-2 200次 4×100ml 2×70ml 120ml 2×30ml 20ml 200个

注:溶液XY3初次使用前用无水乙醇按1:3稀释,即含75%乙醇。

注意事项:

1. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm ,室温离心。

2. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml 无水乙醇。

3. 加XY1液100μl 后,要漩涡振荡或上下来回颠倒,确保形成均一的细胞悬液,此步骤非常重要,否则此

后DNA 易聚集成团,难以被充分裂解,降低得率。

4. 提取微量DNA 样本时,振荡后静置时间可以延长至20min ,中间振荡数次;

5. 样本单次提取的限量是:全血

6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液30-100μl ,低于30μl 将不能保证吸附膜被充分浸润;室温放置2min 可以洗脱绝大部分DNA ,如果是要求全部回收(如微量DNA 提取),则放入55℃-60℃水浴5min 。

7. 洗脱液pH

8. 提取的DNA 可以放在4℃或-20℃保存数周,长期应在-80℃分装保存,避免反复冻融。

操作方案:

1. 样本预处理

ⅰ.抗凝全血及骨髓:

(1)取1-200μl 放入1.5ml eppendorf 管中,加1ml 溶液XY1,漩涡振荡或上下来回颠倒混匀5-10次,离心1min ,充分吸弃上清,留下底部细胞团块;

(2)再加500μl 溶液XY1, 漩涡振荡或上下来回颠倒悬浮, 然后5000rpm, 离心1分钟,弃上清,留下底部细胞团块;

(3)加100μl 溶液XY1,漩涡振荡或上下来回颠倒混,确保形成均一的细胞悬浮液;

(如果从鸟类、两栖类或更低级的动物中提取基因组DNA, 因其血液中红细胞有核, 血液用量勿超过10 μl). ⅱ.培养细胞:悬浮细胞(2×106)离心后吸去上清留下细胞团块,加入XY1液100μl ,漩涡振荡或上下来回颠倒混,确保形成均一的细胞悬液;贴壁细胞倒去培养上清后,加XY1液(100μl/2×106细胞),静置2min ,轻轻晃动形成细胞裂解液,取100μl 放入eppendorf 管中;

ⅲ.组织块:加XY1液(100μl/10mg组织)研磨组织,收集悬液50μl-100μl 放入eppendorf 管中(也可采用液氮中捣碎或匀浆的方法);

ⅳ.体液及其它液体性样本:尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10ml ,离心1min ,吸弃上清,加入XY1液100μl ,漩涡振荡或上下来回颠倒混,确保形成均一的细胞悬液(细胞密度较大的样本参照培养悬浮细胞处理);痰液用粗头吸管直接吸取约100μl ,放入eppendorf 管中;

ⅴ.头发:连毛囊拔取后,剪取近发根处约5mm ,放入eppendorf 管中;

ⅵ. 其它:如咽拭子、血迹斑块、沾染布片、烟头、邮票等,直接剪取可能的痕迹沾染部分(直径

2. 加入600μl 细胞核裂解液XY2, 漩涡振荡悬浮沉淀, 室温放置10分钟,12000rpm, 离心2分钟。

3. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置2分钟,12000rpm, 离心2分钟,弃滤液。

4. 加500μl 漂洗液WP 于柱中, 12000rpm,离心1分钟,弃滤液。

5. 加500μl 溶液XY3于柱中, 12000rpm,离心1分钟,弃滤液。

6. 重复步骤4。

7. 12000rpm再离心2分钟,以便去除干乙醇。

8. 将纯化柱置于一新1.5ml 小离心管中, 加30-100μl 溶液Elutent 于柱中央,室温放置2分钟, 12000rpm, 离心2分钟, 得到基因组DNA 溶液。

* 血液基因组DNA 快速提取试剂盒(离心法)

产品简介:

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸, 再以特异性结合DNA 的离心吸附柱吸附DNA, 通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份, 然后通过洗脱得到高纯度的血液基因组DNA. 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA ,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。从1μl-200μl 全血中可以提取到3-35 μg DNA. 本试剂盒可用于新鲜血液及冷冻血保存液基因组DNA 的提取.

产品特点:

简单快速:30分钟内即可获得超纯的基因组DNA 。

超纯高质:获得的DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。

安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.

试剂盒组成:

产品编号

GS006-1

试剂盒组成

纯化次数 50次 GS006-2 200次

红细胞裂解液RS

裂解液LS

漂洗液PE

洗脱液Eluent

纯化柱 80ml 35ml 15ml 5ml 50个 4×80ml 2×65ml 3×20ml 20ml 200个

注:漂洗液PE 初次使用前用无水乙醇按1:3稀释,即含75%乙醇。

操作步骤

1. 加1ml 红细胞裂解液RS 于1.5ml 小离心管中, 然后加入血液1-200μl 加有抗凝剂的血液, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀, 5000rpm, 离心1分钟,弃上清.

注:如果从鸟类、两栖类或更低级的动物中提取基因组DNA, 因其血液中红细胞有核, 血液用量勿超过10μl 。

2. 加500μl 红细胞裂解液RS, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀, 5000rpm,离心1分钟,弃上清。

注:若红细胞溶解不完全, 则沉淀物发红, 可再加300μl 红细胞裂解液RS, 漩涡振荡混匀,5000rpm, 离心1分钟。

3. 加入100μl 红细胞裂解液RS, 完全悬浮沉淀。

4. 加入600μl 裂解液LS, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀后, 室温放置10-15分钟。

5. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置2分钟,12000rpm, 离心2分钟,弃滤液。

6. 加500μl 漂洗液PE 于柱中, 12000rpm,离心1分钟,弃滤液。

7. 重复步骤6。

8. ≥12000rpm再离心2分钟,以便去除干乙醇。

9. 将纯化柱置于一新1.5ml 小离心管中, 加30-100μl 洗脱液Eluent 于纯化柱中央, 室温放置2分钟, 12,000rpm~14,000rpm, 离心2分钟, 得到DNA 溶液。

注:洗脱缓冲液体积不应少于30μl ,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内,pH 值低于7.0 会降低洗脱效率;且DNA 产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。DNA 浓度及纯度检测得到的基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳单链DNA 。OD260/OD280 比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA 、40 μg/ml

储存条件:该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存24 个月.

* 组织基因组DNA 提取试剂盒(离心法)

产品简介:

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸, 再以特异性结合DNA 的离心吸附柱吸附DNA, 通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份, 然后通过洗脱得到高纯度的基因组DNA. 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA ,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。

产品特点:

简单快速:30分钟内即可获得超纯的基因组DNA 。

超纯高质:获得的DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。

安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.

试剂盒组成:

产品编号

GS007-1

试剂盒组成

纯化次数

缓冲液ZS

裂解液LS

漂洗液PE

洗脱液Eluent

纯化柱 50次 25ml 35ml 15ml 5ml 50个 GS007-2 200次 100ml 2×70ml 2×30ml 20ml 200个

注:溶液DZPE 初次使用前用无水乙醇按1:3稀释,即含75%乙醇。

组织基因组DNA 提取操作步骤:

∙ 1. 将样品研磨成匀浆后(100μl 缓冲液ZS/10mg组织),取100μl 放入1.5 ml离心管中,或用液氮研磨成粉末后取10mg 放入1.5 ml离心管中, 加100μl ZS漩涡振荡混匀,确保形成均一的悬浮液,室温放置5分钟。 2. 加入600μl 裂解液LS, 漩涡振荡悬浮沉淀, 室温放置10分钟,12000rpm, 离心1分钟。 3. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置2分钟,12000rpm, 离心2分钟,弃滤液。 4. 加500μl 漂洗液PE 于纯化柱中, 12000rpm,离心1分钟,弃滤液。 5. 重复步骤4。 6.12000rpm 再离心2分钟,以便去除干乙醇。 7. 将纯化柱置于一新1.5ml 小离心管中, 加30-100μl 洗脱液Eluent 于纯化柱中央, 室温放置2分钟.

12000rpm, 离心2分钟, 得到DNA 溶液。

注:洗脱缓冲液体积不应少于30μl ,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内,pH 值低于7.0 会降低洗脱效率;且DNA 产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。DNA 浓度及纯度检

测得到的基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳单链DNA 。OD260/OD280 比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA 、40 μg/ml

注:所用的组织量不要多于10mg 。

储存条件:该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存24 个月.

* 培养细胞基因组DNA 提取试剂盒(离心法)

产品简介:

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸, 再以特异性结合DNA 的离心吸附柱吸附DNA, 通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份, 然后通过洗脱得到高纯度的基因组DNA. 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA ,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。

产品特点:

简单快速:30分钟内即可获得超纯的基因组DNA 。

超纯高质:获得的DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。

安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.

试剂盒组成:

产品编号

GS008-1

试剂盒组成

纯化次数

缓冲液XS

裂解液LS

漂洗液PE

洗脱液Eluent

纯化柱 50次 25ml 35ml 15ml 5ml 50个 GS008-2 200次 100ml 2×70ml 2×30ml 20ml 200个

注:溶液JYPE 初次使用前用无水乙醇按1:3稀释,即含75%乙醇。

培养细胞基因组DNA 提取操作步骤:

1. 用1.5 ml离心管收集0.5-1.0ml 菌液,12000rpm 离心60秒,弃上清。

∙ 2. 加100μl 缓冲液XS, 漩涡振荡或上下来回颠倒混匀,完全悬浮沉淀,室温放置5分钟,以便下一步裂解充分。 3. 加入600μl 裂解液LS, 漩涡振荡悬浮沉淀, 室温放置10分钟。 4. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置2分钟,12000rpm, 离心2分钟,弃滤液。 5. 加500μl 漂洗液PE 于纯化柱中, 12000rpm,离心1分钟,弃滤液。 重复步骤5。 6.12000rpm 再离心2分钟,以便去除干乙醇。 7. 将纯化柱置于一新1.5ml 小离心管中, 加30-100μl 洗脱液Eluent 于纯化柱中央, 室温放置2分钟,

12000rpm, 离心2分钟, 得到DNA 溶液。

注:洗脱缓冲液体积不应少于30μl ,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内,pH 值低于7.0 会降低洗脱效率;且DNA 产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。DNA 浓度及纯度检测得到的基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA 、40 μg/ml 单链DNA 。OD260/OD280 比值应为

1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

储存条件:该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存24 个月.

* 植物基因组DNA 快速提取试剂盒(离心法)

产品简介:

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液,裂解细胞释放出核酸, 再以特异性结合DNA 的离心吸附柱吸附DNA, 通过特殊的漂洗液除去余留的蛋白和盐份, 然后通过洗脱得到高纯度的基因组DNA. 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA ,可最大限度去除杂质蛋白、RNA 及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交、分子标记分析等实验。从100mg 植物组织中可以提取到3-35 μg DNA.

产品特点:

简单快速:30分钟内即可获得超纯的基因组DNA 。

超纯高质:获得的DNA 纯度高,可直接用于酶切、Southern 杂交、PCR 等分子生物学实验。

安全方便:整个操作中不用酚/氯仿有机物.

试剂盒组成:

产品编号

GS009-1

试剂盒组成

纯化次数

裂解液PLS

漂洗液PE

洗脱液Eluent

纯化柱 50次 35ml 15ml 5ml 50个 GS009-2 200次 2×70ml 2×30ml 20ml 200个

注:溶液PE 初次使用前用无水乙醇按1:3稀释,即含75%乙醇。

植物基因组DNA 提取操作步骤:

∙ 1. 将样品研磨成匀浆后(700μl 裂解液PLS/100mg组织),转移至1.5 ml 离心管中,或用液氮研磨成粉末后取100mg 放入1.5 ml离心管中, 加700μl 裂解液PLS 漩涡振荡混匀. 2. 室温放置10分钟,12000rpm, 离心2分钟。 3. 将上清转移至核酸纯化柱中,室温放置2分钟,12000rpm, 离心2分钟,弃滤液。 4. 加500μl 漂洗液PE 于纯化柱中, 12000rpm,离心1分钟,弃滤液。 5. 重复步骤4。 6.≥12000rpm离心2分钟,以便去除干乙醇。 注:此步除去乙醇很重要,否则会影响洗脱。 7. 将纯化柱置于一新1.5ml 小离心管中, 加30-100μl 洗脱液Eluent 于纯化柱中央, 室温放置2分钟,

12000rpm, 离心2分钟, 得到DNA 溶液。

注:洗脱缓冲液体积不应少于30μl ,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内,pH 值低于7.0 会降低洗脱效率;且DNA 产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。DNA 浓度及纯度检测得到的基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA 、40 μg/ml 单链DNA 。OD260/OD280 比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

储存条件:该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存24 个月.


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