一、脯氨酸的测定方法：
在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline ，Pro ）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。
一、原理
用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm 波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。
（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；
5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8. 注射器；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。
（三）试剂1. 酸性茚三酮溶液：将1.25g 茚三酮溶于30ml 冰醋酸和20ml6mol/L磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2. 3％磺基水杨酸：3g 磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml ；3. 冰醋酸；4. 甲苯。
三、实验步骤
1. 标准曲线的绘制
（1）在分析天平上精确称取25mg 脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml 含脯氨酸100μg。
（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml 容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，
1.5，2.0，2.5及3.0ml ，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ml。
（3）取6支试管，分别吸取2ml 系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml 冰醋酸和2ml 酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min 。
（4）冷却后各试管准确加入4ml 甲苯，振荡30S ，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm 波长处进行比色。
（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y ）依脯氨酸浓度（X ）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml 测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）。
2. 样品的测定
（1）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g ，分别置大管中，然后向各管分别加入5ml3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min ，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。
（2）吸取2ml 提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入2ml 冰醋酸及2ml 酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min ，溶液即呈红色。
（3）冷却后加入4ml 甲苯，摇荡30S ，静置片刻，取上层液至10ml 离心管中，在3000rpm 下离心5min 。
（4）用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm 波长处比色，求得吸光度值。
四、结果计算根据回归方程计算出（或从标准曲线上查出）2ml 测定液中脯氨酸的含量（Xμg/2ml），然后计算样品中脯氨酸含量的百分数。计算公式如下： 脯氨酸含量（μg/g）＝[X×5/2]/样重（g ）。
二、丙二醛含量的测定
1. 原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA ）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA 了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在 高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA ）反应产生 红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在 532 nm 处有一吸收高峰，并且在 处有较小光吸收。由于醛、可溶性糖对此反应有干扰，在 用双组分分光光度法加以排除。
2. 步骤
试剂：（1）10%三氯乙酸（TCA ）：TCA --------------25g
加ddH 2O 至---------250ml
（2）0.6%硫代巴比妥（TBA ）：TBA ------------0.6g
加5%TCA至---------100ml
实验步骤：
（1）称取材料0.1g ，加10% TCA 2ml研磨至匀浆，再加8ml 进一步研磨；
（2）4000rpm 离心10min ，取上清至新管；
（3）2ml 提取液+2ml 0.6% TBA，混合均匀，2ml ddH 2O+2ml 0.6% TBA为空白对
照；
（4）混合沸水浴15min ，冰上冷却；
（5）4000rpm 离心10min ；
（6）取上清再532nm ，600nm ，450nm 波长下的光密度值。
3. 计算方法
式中，Vt ：提取液总体积（mL ）----------------10ml ；
Vs：测定用提取液体积（ml ）-------------2ml ；
FW：样品鲜重（g ）---------------------0.1g 。
三、 转基因植株离体条件下失水速率统计
将四叶期植株的地上部分剪下，置于室温条件下，分别在不同的时间点（0、0.5、1、2、4、6、8、12和24h) 称量植株的重量，统计其失水速率的快慢。失水率的计算公式为：
失水率Y(％)=(X0-X n )/X0×100
X 0：开始植株的重量；X n ：某时间点植株的重量。
四、相对电导率的测定
植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常情况下细胞膜对物质具有选择透性能力。当植物受到逆境（如高温或低温、干旱、盐渍、病原菌侵染后）影响时，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，电导率增大。 膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关，所以被作为植物抗逆性的一项指标。相对电导率的测定步骤如下：
（1）取0.1g 对照和PEG6000处理的转基因水稻阴性对照和转基因株系三叶期叶片，切成小段，每种处理三个重复；
（2）用双蒸水冲洗叶片几遍，除去叶片表面附着的电解质；
（3）加10 ml双蒸水, 在恒温箱中25℃振荡温育1小时，期间经常摇动，测定此时的电导率记为C1；
（4）将盛有水稻叶片的试管100℃煮沸15 min，冷却到室温后测定，此时的电导率记为C2；
（5）相对电导率根据公式计算：Relative ion leakage = (C1 - C0) / (C2 - C0) ×100