QB
瑞阳制药有限公司企业标准
QB/RY.4.02.2061024
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冻干粉针剂车间（206）
洁净区沉降菌检测标准操作规程
2015-11-23颁发 2015-12-01实施 ———————————————————————— 瑞阳制药有限公司 粉针事业部综合办公室 颁发
目 录
1. 目的 ........................................................ 1 2. 主题内容与适用范围 .......................................... 1 3. 定义 ........................................................ 1 4. 引用标准 .................................................... 2 5. 操作规程 .................................................... 2 6. 重点操作复核制 ............................................. 14 7. 中间产品质量标准和控制规定 ................................. 15 8. 安全防火及劳动保护 ......................................... 15 9. 异常情况的处理和报告 ....................................... 15 10. 设备维护及使用 ............................................ 16 11. 技术经济指标的计算 ........................................ 16 12. 度量衡的使用与校正 ........................................ 16 13. 相关记录 .................................................. 16 14. 附录 ...................................................... 16
1. 目的
建立冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测标准操作规程，确保洁净区内沉降菌检测的操作符合质量要求。 2. 主题内容与适用范围
本规程规定了冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测的相关目的；相关定义及引用标准；规定了生产操作方法；重点操作复核；质量标准与控制；安全防火与劳动保护；异常情况的处理和报告；设备的维护及使用；技术经济指标的计算；度量衡器的使用与校正；以及相关记录和附录。
本规程适用于冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测的操作。 3. 定义
3.1 洁净室（区）：需要对环境中尘埃及微生物污染进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留。
3.2 沉降菌：用《医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法》提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
3.3 菌落： 细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集合体，称为菌落，简称CFU。通常用个数表示。
3.4 动态：指生产设备按预定的工艺模式运行并有规定数量的操作人员在现场操作的状态。
3.5 动态测试： 洁净室（区）已处于生产状态下的测试。
3.6 警戒限度： 系统的关键参数超出正常范围，但未达到纠偏限度，需要引起警觉，可能需要采取纠正措施的限度标准。
3.7 纠偏限度：系统的关键参数超出可接受标准，需要进行调查并采取纠正措施的限度标准。
3.8 单向流：指空气朝着同一个方向，以稳定均匀的方式和足够的速率流动。单向流能够持续清除关键操作区域的颗粒。
3.9非单向流：具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流
定义的气流。 4. 引用标准
《药品生产质量管理规范（2010年修订）》 《医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法》 《生产工艺规程》 5. 操作规程 5.1 工作原理
沉降菌通过自然沉降原理，收集空气中的微生物粒子于胰蛋白胨大豆营养琼脂培养皿中，取样后放入32.5℃±2.5℃的恒温箱内倒置培养不少于48小时，让其繁殖到可见的菌落计数，以培养皿中的菌落数来判定洁净环境内活微生物数。 5.2 检测频次及检测标准
表1
备注: 1. 当某一指标达到警戒限度应查找原因。
2. 单个沉降菌碟的暴露时间可以少于4小时，少于4小时的标注采样时长并按4小时折算计(4*实际菌落个数/实际小时数)，在生产时间可预知的前提下，单个沉降菌碟的暴露时间少于4小时的，同一位置可使用多个沉降菌碟连续进行监测并累计计数。 5.3 检测状态
静态测试、动态测试
5.4 检测人员
A级区、B级区、C级区：车间质检员、岗位班组长 D级区：岗位班组长 5.5 检测条件 5.5.1 温度和相对湿度
表2
5.5.2 压差：相同洁净度级别的不同功能区域（操作间）之间应当保持适当的压差梯度，空气洁净度不同的洁净室之间压差≥10Pa，洁净区相对一般生产区≥10Pa。
洁净区（室）空气与室外大气保持相对正压，其静压差大于10Pa，易产生粉尘的洁净区（室）与其相邻的洁净区（室）保持相对负压,其静压差大于5Pa。
5.5.3 静态a测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。对非单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。在静态b测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。
5.5.4 在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。 5.6 采样点的确定及计数标准 5.6.1 最少采样点数目 NL=
A—洁净室或被控洁净区的面积，单位平方米（㎡） NL—最少采样点数(四舍五入取靠近的整数)； 5.6.2 最少培养皿数
表3
5.6.3 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 5.6.4 平均菌落数的计算
平均菌落数M =（M1＋M2＋…＋Mn）/n
M：平均菌落数 M1：1号培养皿菌落数 M2：2号培养皿菌落数 Mn：n号培养皿菌落数 n：培养皿总数
5.7 各洁净级别各岗位检测采样点数、位置以及检测周期、检测标准：
表3 各房间沉降菌检测采样点列表
表3 各房间沉降菌检测采样点列表（续）
表4 各房间沉降菌采样点位置、检测频次、检测标准
表4（续） 各房间沉降菌采样点位置、检测频次、检测标准
表4 各房间沉降菌采样点位置、检测频次、检测标准
5.8 各洁净级别各岗位验证期间采样点数、位置（如表5）按照附录中14.2.2附录A1图所示标志位置安放，验证期过后将趋势分析后可以略去位置点的标志去掉，即为日常沉降菌检测点位置：
表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表
表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表（续）
表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表（续）
表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表（续）
5.9检测方法
5.9.1 A级洁净区沉降菌检测：
车间质检员、灌装岗位班组长在取无菌衣间取出灭菌后在32.5℃±2.5℃的恒温培养箱内放置不超过72h且检查外观无异常的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，按A级洁净区沉降菌采样点布置图打开培养皿盖放置于工作台面上20cm处，培养基表面暴露4小时后，按照摆放先后顺序依次将培养皿盖上盖收集，边收集边放新的培养皿，收集完毕后将盛放培养皿的专用容器盖好盖，7#放入传递窗（206-103）。车间质检员将传递窗内培养皿取出，放入恒温培养箱内32.5℃±2.5℃倒置培养48小时。培养皿进入A级层流 需用无菌抹布蘸取75%乙醇溶液擦拭外表面一遍晾干后，放在A级区指定位置。
5.9.2 B级洁净区沉降菌检测：
车间质检员、班组质检员按照《B级洁净区更衣标准操作规程》（文件编号：QB/RY.4.02.2061014，XX）更衣进入B级洁净区，将32.5℃±2.5℃的电热恒温培养箱内放置不超过72h且检查外观无异常的胰酪胨大豆胨琼脂培养基做好标记，打开皿盖后，按B级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.8～1.5m处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控整个生产过程，如果四小时生产未结束，将原来的收起后，重新摆放），按照摆放先后顺序依次将培养皿盖上盖倒置收集，经7#传递窗（206-103）传至质检室，置于电热恒温培养箱内32.5℃±2.5℃倒置培养48小时。
5.9.3 C级洁净区沉降菌检测：
轧盖岗位：车间质检员、班组长按《C级洁净区更衣标准操作规程》（文件编号：QB/RY.4.02.2061013，XX）更衣，取出由B级洁净区人员经10#（206-106）、2#（206-098）传递窗传至C级洁净区的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，打开培养后，按C级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.8～1.5m处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控工作期间后四小时），再将培养皿盖上盖倒置收集，经8#传递窗（206-104）传至质检室
内，置于电热恒温培养箱内32.5℃±2.5℃倒置培养48小时。
洗衣岗位、配药岗位：车间质检员、班组质检员按《C级洁净区更衣标准操作规程》（文件编号：QB/RY.4.02.2061013，XX）更衣，取出由B级洁净区人员6#经传递窗（206-102）传至C级洁净区的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，打开皿盖后，按C级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.8～1.5m处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控工作期间后四小时），再将培养皿盖上盖倒置收集，经3#传递窗（206-099）传至质检室内，置于电热恒温培养箱内32.5℃±2.5℃倒置培养48小时。 5.9.4 D级洁净区沉降菌检测：
班组质检员按《D级洁净区更衣标准操作规程》（文件编号：QB/RY.4.02.2061046，XX）更衣， B级洁净区人员经10#传递窗（206-106）传至D级洁净区，传入D级洁净区的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，打开皿盖后，按D级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.8～1.5m（采样架高度）处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控工作期间后四小时），再将培养皿盖上盖倒置收集，经9#传递窗（209-105）传至质检室，置于电热恒温培养箱内32.5℃±2.5℃倒置培养48小时。 5.10 培养基使用完毕后处理程序。
5.11 采样过程填写沉降菌采样记录；菌落计数过程填写培养皿查看记录。 6. 重点操作复核制
6.1 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染，每批选定3支培养皿作对照培养。
6.2 取样检测过程中应防止样本的人为污染，采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染应剔除。
6.3 一般布局在距离地面0.8m-1.5m之间或操作平台的高度，应离开尘粒较集中的回风口1.2m处。
6.4 培养基灭菌后在30-35℃的环境中暂存。
6.5菌落计数：用肉眼观察每个培养皿中的菌落数。然后用5~10倍放大镜检查，是否有遗漏；若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时
仍以2个或2个以上菌落计数。对培养皿中的菌落要仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。 6.6 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。
6.7 车间目前发现的菌经质检处鉴别为葡萄球菌和链球菌，若发现新菌群，车间应立即停产并及时送质检处进行鉴别，并进行消毒剂效力验证，确定消毒剂对此菌的消毒效果，如使用的消毒剂效力验证合格车间继续生产，若验证不合格车间进行厂房清洁和消毒后进行生产。 6.8 每批培养基必须在配制后72h内使用完毕。
6.9 动态检测时，应记录生产开始的时间、检测时间及该区域测试人员数。 6.10 在检测之前及检测完成后，必须保持培养皿处于倒置状态。 6.11 对于非每天、每班次和连续检测的点，需要在停产后再生产时、停产前最后一天进行沉降菌检测。
6.12 当菌落检测结果超过警戒限时，岗位人员应及时告知QA、车间负责人并填写异常情况处理记录，QA、车间负责人对其进行原因调查分析。当菌落检测结果超过纠偏限时，应做偏差分析并报废产品。 7. 中间产品质量标准和控制规定
_______________ 8. 安全防火及劳动保护
8.1 操作人员上岗操作必须按更衣程序要求穿戴好工作服、鞋、帽并注意防滑。
8.2 岗位严禁烟火。
8.3 所有电源插座，严禁接触潮湿物品，清场时，要切断机器的总电源以防触电。
9. 异常情况的处理和报告
出现异常情况时，应按照以下方法立即处理：
表6
10. 设备维护及使用 _______________ 11. 技术经济指标的计算 _______________ 12. 度量衡的使用与校正 _______________ 13. 相关记录 _______________ 14. 附录 14.1 图纸
14.1.1 附录A：洗衣工序沉降菌检测记录 每周 14.1.1 附录B:洁净区沉降菌检测图
14.1.2 附录C:洁净区沉降菌检测图 (验证专用) 14.2相关状态标识 _____________
14.3规程变更历史
附录A 记录编号：JL206-075
附录B 洁净区沉降菌采样点分布图
附录C 洁净区沉降菌采样点分布图(验证专用)