第$.卷.##3年"月
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分析化学（M:0TU8VNTV:）!研究报告;I?BJWJX1OYBDQ1FNBDQZ[?HDQ;IJ=?W[YZ
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第"期&4"$
血浆和尿中苯并二氮杂!类药物及其代谢物的电子捕获气相色谱筛选分析法
姚丽娟#!谭家镒!姜兆林!邢丽梅
（中国刑警学院法医系，沈阳""##$%）
摘!要!建立了血浆和尿中""种苯并二氮杂!类药物及其&种代谢物的电子捕获检测气相色谱分析方法。血浆及加!’葡萄糖醛酸酶水解后的尿在碱性条件下用苯’异戊醇（&()%*")%）提取，提取物非衍生化或三甲硅烷基衍生化后进行色谱分析。分析采用两根极性不同的色谱柱。检材中分析物的检出限大多数低于"#本方法还可用于定量分析。自愿者服口服治疗量药物，其血浆、尿中药物和代谢物的分析结果表明：本"+,-，
方法实用于麻醉抢劫案中的药物分析。
尿关键词!苯并二氮杂!类药物，气相色谱法，血浆，
!"引""言
苯并二氮杂!类药物，常见于成瘾滥用和麻醉后犯罪以及过量服用自杀，尤以三唑仑、阿普唑仑、氟硝西泮、氯硝西泮和地西泮等在麻醉抢劫案中使用较多。血、尿等生物检材中，该类药物及其代谢物的分析在司法鉴定中具有重要的意义。
［"］［.］［$4%］［2］
、薄层色谱法、气相色谱法、气’质联用法和已报道的该类药物的分析方法有免疫分析法
［/］
高效液相色谱法等。本实验建立了血浆和尿中的""种该类药物及其&种代谢物的非衍生化和三甲
硅烷基（567）衍生化的电子捕获检测气相色谱分析方法。
#"实验部分
#)!"色谱仪及色谱条件
89’2(&#气相色谱仪（美国惠普公司），配置"’:;
（"%=?B），气化89’%柱：$#=>#)$.==?)@)（膜厚#).%"=）；柱温.##A（"=?B）’’’’$.(#A
检测器温度$##A；不分流进样（阀关闭时间#)/=?B），载气高纯氮（恒压，压力""2)/温度.%#A，
C9D），尾吹高纯氮（2#=-,=?B）。89’%#E柱：$#=>#)$.==?)@)（膜厚#)""=），柱温.##A（"=?B）（"%=?B），载气高纯氮（恒压，压力".")"C9D），其余条件同89’%柱。’’’’$.(#A
#)#"试剂和材料
地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑、氯硝西泮、利眠宁、氟西泮（国家麻醉品实验中心）、氟硝西泮、劳拉西泮（美国新泽西州司法鉴定研究所）、"’羟基三唑仑、"’羟基阿普唑仑和去甲西泮（美国7?+=D公司），/’氨基氟硝西泮、/’氨基氯硝西泮、去甲氟硝西泮、羟乙基氟西泮、去烃基氟西泮和去甲氧西泮（瑞士81FF=DB-DG1HIJ公司）。以上试剂分别用甲醇配制成"##=+,-标准储备液，临用时稀释成"#及"=+,-标准工作液，并根据在所用色谱条件下的!G分布，配制成各分析物浓度均为"#=+,-的混合标准液数种。
（美国7?+=D公司）：临用时加水配制成"####单位,=-溶液；0，K’双三甲硅烷基!’葡萄糖醛酸酶
美国7OPJQH1公司）：含"R三甲基氯硅烷（56;7）；苯、异戊醇、二氯甲烷、正己烷、三氟乙酰胺（L75MN，
［(］
甲醇等溶剂：分析纯试剂，蒸馏后使用；衍生化用无水乙酸乙酯：分析纯试剂，按文献方法处理。P8
.#A,=?B
.#A,=?B
3S(缓冲溶液：乙酸钠（不含结晶水）3")#+，加$2R乙酸($)$=-，加水至%##=-；P8"#)(缓冲溶液：碳
.##$’#"’./收稿；.##$’#&’"#接受本文系国家“九五”重点科技攻关项目资助课题（01)&2’&"&’#"’#%’3）
酸钠（不含结晶水）!"#$%，碳酸氢钠&’#$%，加水溶解至!$$()。实验用水为二次蒸馏水；空白血浆购自沈阳市中心血站，含柠檬酸钠抗凝剂，新鲜；空白尿：近期未服药物健康人体排泄，新鲜。!#"#样品处理
取待检尿*()放入试管中，加+,&#-缓冲溶液!$!)，加".葡萄糖醛酸酶溶液*$$!)，置"/0水浴中水解*&1（过夜），放冷，加+,*$#-缓冲溶液$#!()，或取待检血浆*()放入试管中，加+,*$#-缓冲溶液$#!()，加苯.异戊醇（2-#!3*#!）!()，涡旋’(45，"$$$67(45离心8(45，分取有机相置于带*()刻度尾管的’$()鸡心瓶中，置*$$9**$0甘油浴中挥干，加无水乙酸乙酯!$!)溶解剩余物，抽取*!)进样，直接进行分析。剩余溶液中加入:;’$!)，加塞密闭，尾管插入8$0甘油浴中进行衍生化反应"$(45，然后在缓慢的氮气流下8$0挥干（除去剩余:;），加无水乙酸乙酯!$!)溶解剩余物，抽取*!)进样，进行衍生化而后的分析。
"#结果和讨论
"#$#色谱分离
非衍生化及
柱分析尿的色谱图及用两支柱分析血浆的色谱图略。
药物标准品分析也未发现对本类药物及代谢物分析的干扰。!!"#检出限
（!"##"）的检材分析物浓度为分析物的检出以检材中分析物色谱峰高相当于基线噪音强度"倍限（$%&%’()*+’+,’%(-或./0），如表1和表2所示。
表13非衍生化分析测得的提取率、保留时间和检出限
456$+1347++8’95,’%(-+))%,%+-,:，9+’+-’%(-’%&+5-*$%&%’()*+’+,’%(-();-*+9%%>
分析物?-5$:’+
奥沙西泮/85=+L5&劳拉西泮.(95=+L5&地西泮0%5=+L5&去烃氟西泮
0+>5$R:$)$;95=+L5&去甲西泮S(9*%5=+L5&利眠宁T7$(9*%5=+L(8%*+PF氨基氟硝西泮PF?&%-()$;-%’95=+L5&氟硝西泮U$;-%’95=+L5&羟乙基氟西泮
E:*9(8:+’7:$)$;95=+L5&去甲氧西泮0+&(8+L5&去甲氟硝西泮
0+>&+’7:$)$;-%’95=+L5&氟西泮U$;95=+L5&硝西泮S%’95=+L5&1F羟基阿普唑仑1FE:*9(8:5$L95=($5&PF氨基氯硝西泮PF?&%-(,$(-5=+L5&氯硝西泮T$(-5=+L5&1F羟基三唑仑1FE:*9(8:’9%5=($5&艾司唑仑A>’5=($5&阿谱唑仑?$L95=($5&三唑仑49%5=($5&
提取率（@）A8’95,’%(-+))%,%+-,:尿B9%-+M"!"MP!PMN!NMP!2MQ!"MP!PMH!"MQ!"QH!OMN!1MO!NM"!"MG!GM"!"M"!"M"!NM1!1MQ!HMP!PQH!H
血浆C$5>&5MH!NM2!1PQ!MMO!OM1!HMH!HPP!OM2!1MN!NMP!1M"!2PM!NPN!NMO!1PP!NMG!1M2!1QH!"Q1!1QH!N
保留时间（&%-）D+’+-’%(-’%&+ECFGG!NGN!12N!2NN!"1N!NON!PHP!HQP!"GP!P1P!P2P!QNM!G2M!GGM!POQ!22Q!"1Q!MNQ!QH1H!O111!PH
ECFGHIG!ONN!12N!"GN!PMP!"PP!GGP!"GM!2MQ!HHP!O11H!O1M!PH11!QH11!MN1G!OP1"!PQ1M!"11G!P11N!"G1Q!NQ
ECFGGPN"OMGNN2MQON"1OMN11G"2
检出限.%&%’()*+’+,’%(-（!JK.）尿B9%-+
ECFGHI1HHO22H2H2G2MHQOOMGH1H1HG1OPP1N""M
血浆C$5>&5ECFGONP2"NHOG1NOON212NN12""2
ECFGHI
"N2O1M2H121NHMHONOHP1"G12PP1G2"2
表234VW衍生化分析的保留时间和检出限
456$+2347+9+’+-’%(-’%&+5-*$%&%’()*+’+,’%(-()4VW*+9%%>
分析物?-5$:’+
去甲西泮S(9*%5=+L5&去甲氧西泮0+&(8+L5&奥沙西泮/85=+L5&
去烃氟西泮0+>5$R:$)$;95=+L5&劳拉西泮.(95=+L5&
羟乙基氟西泮E:*9(8:+’7:$)$;95=+L5&去甲氟硝西泮0+>&+’7:$)$;-%’95=+L5&PF氨基氯硝西泮PF?&%-(,$(-5=+L5&硝西泮S%’95=+L5&氯硝西泮T$(-5=+L5&
1F羟基阿普唑仑1FE:*9(8:5$L95=($5&1F羟基三唑仑1FE:*9(8:’9%5=($5&
保留时间（&%-）D+’+-’%(-’%&+ECFGG!2NG!OQG!PQN!2NN!O2P!GQP!N2P!MGM!G2Q!2M11!2N1"!HG
ECFGHIO!OPO!"OO!OQO!"QG!1HP!H"G!PON!2HG!QGP!HO1O!"G1P!PP
ECFGGQNNMOO1HNM22
检出限.%&%’()*+’+,’%(-（!JK.）尿B9%-+
ECFGHI
M121H121OM1H1HP1H22
GNOGOO2MGN"1
血浆C$5>&5ECFG
ECFGHI
MMN1212NNOPO22
33含有羟基（如1F羟基三唑仑）、氨基（如PF氨基氯硝西泮）和二氮杂!环1位氮原子上有氢原子（如去甲西泮、硝西泮）的分析物可以非衍生化分析，也可以4VW衍生化分析，其中1F羟基三唑仑和1F羟基
阿普唑仑衍生化后分析灵敏度显著提高。奥沙西泮和劳拉西泮是两种含羟基的分析物，衍生化分析灵敏度未见提高，其原因可能是由于它们的非衍生化分析中在气化室中分解成为不含羟基的物质，形成单
［!］一的不拖尾色谱峰，也具有较高的灵敏度。
!"!"定量分析
用所建立的方法进行了定量分析，结果表明：该筛选分析方法也可用于定量分析（见表!）。
表!#线性关系和回收率
$%&’(!#)*+(%,*-.%+/,(012(,.
线性关系)*+(%,*-.
色谱柱31’45+
分析物6+%’.-(
检材78(0*5(+血浆C’%
方法9(-:1/非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+衍生化H+/(,*2%-D*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+非衍生化
H+/(,*2%-*G%-*1+衍生化H+/(,*2%-D*G%-*1+
衍生化H+/(,*2%-D*G%-*1+
内标物;+-(,+%’
羟乙基氟西泮B./,1Q.(-:.’D?’4D,%G(8%5
线性范围
相关系数
)*+(%,*-.
31,,(’%-*1+
,%+=(
01(??*0*(+-（!=>)）JKLJKKKJKLJKKKJELJKKKELOKKKOKLOKKKOKLOKKKOKLOKKKJKLJKKKJELJKKKOKLOKKKOKLOKKKOKLOKKKOKLOKKK
K"MMMK"MMMK"MMSO"KKKK"MMRK"MM!K"MMMK"MMSK"MMRO"KKKK"MMMK"MMNK"MMT
回收率（@）A(012(,.
BCDEBCDEBCDEBCDEBCDEBCDEBCDEBCDEBCDEBCDEKVBCDEBCDEBCDE
地西泮F*%G(8%5奥沙西泮PQ%G(8%5劳拉西泮)1,%G(8%5氟硝西泮I’4+*-,%G(8%5羟乙基氟西泮B./,1Q.(-:.’?D’4,%G(D8%5
硝西泮U*-,%G(8%5去甲西泮U1,/*%G(8%5氯硝西泮3’1+%G(8%5SD氨基氯硝西泮SD65*+10’1+%G(8%5艾司唑仑W
NN"MLOKE"!MR"RLOKS"TMO"JLOKN"JMR"!LOKT"ENM"OLOKS"!ME"ELOK!"MMO"OLOKR"!MR"KLOKE"JNN"ELOKS"SMR"MLOK!"EM!"NLOKR"KM!"TLOKO"NMS"!LOKM"!
BCDE尿H,*+(OKLOKKKK"MMMMM"OLOK!"S
!"#"服药物自愿者血、尿检测
表明了本文方法的实用性。若干名自愿者口服治疗量药物后取血、尿进行分析，部分结果如表R所示，
表R#口服药物自愿者血、尿中药物或代谢物分析结果
$%&’(R#$:(%+%’.-*0%’,(
药物F,4=
三唑仑$,*%G1’%5阿普唑仑)8,%G1’%5艾司唑仑W
剂量F/1
服药人数U45&(,
!!JJ!JJ
检材及采集时间（服药后时间）78(0*5(+%+/*-
（:14,
尿H,*+(#JKLJR尿H,*+(#JKLJR血浆C’%
分析物6+%’.-(
OD羟基三唑仑ODB./,1Q.-,*%G1’%5OD羟基阿普唑仑ODB./,1Q.%’8,%G1’%5艾司唑仑W
检出浓度（!=>)）31+0(+-,%-*1+OS"S，SO"R，!T"TJR"S，!O"K!O"K，JK"E，JK"JO"N，O"KJJO，JKR，ORMEO，!RJO，OS
!"#"$"%&"’
!"#$%&’$()*!"#$%&"’()*+(&"，()*+，!!：+,-.+,,+"/’$$0)1，2$34’1*!",-.(/%0(1."，()+,，56：+67.++6
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《冶金分析》征订启事
""《冶金分析》杂志是经国家科委批准，由钢铁研究总院、中国金属学会主办和出版的综合性分析化学专业的科技期刊。《冶金分析》办刊宗旨以实用主为，主要报道分析方面的新技术、新方法、先进经验、研究结果，发表综述文章及介绍国内外冶金分析动态等。适合于冶金、矿山、化工、机械、地质、环保、外贸、国防等部门从事冶金分析的科技人员、生产管理人员及大专院校和中等技术学校有关专业的师生阅读参考。
《冶金分析》!B5!年创刊，现为中国科技论文统计用期刊、全国中文核心期刊、中国期刊网全文收录期刊、美国工程信息公司OH数据库收录期刊、美国“P(”千种表我国化学化工类核心期刊。
《冶金分析》在国内外公开发行，每期为大!,开，5D页，+66D年定价5元a本，全年六期为D5元，国内统一刊号PU!!_+6-6aA#，本刊由全国各地邮局发行，邮发代号：5+_!7C。
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