1. 动物麻醉（异氟醚或氯胺酮/赛拉嗪混合物）。2.托吡卡胺滴眼以防眼睛干燥。
3. 4. 5. 背部及腹部脱毛，碘伏和酒精擦拭。
6. 回结肠静脉插管需3.5cm。固定两端。 7. 用止血钳和镊子将大头针垂直取
下，将导管连接至19g
针，用生理盐水冲管。
8. 固定手术窗。
9. 切开腹部皮肤3-5cm。
10. 11定位盲肠和紧邻的沿大网膜下缘走行的横结肠，分离并用纱布定位。分离
回结肠静脉。
12. 放入结扎线，两端用止血钳固定。13. 14. 插管（45度）。
15. 结扎管，通管。
16. 17.18.19.将脏器放回腹腔缝合皮肤。
20.21.22.23.将管固定至背部，缝合皮肤。
24. 通管，缝合背部，装入大头针。实验前观察3-5天。
小鼠灌注固定方法：
1、采用水合氯醛麻醉后剪开胸腔，动作要快，经左心室插入头皮针连接的20ml注射器，（头皮针磨钝，从以身体纵轴45度角方向进针，针尖插入升主动脉内，可以看见，动作要轻柔）同时剪开右心儿，推入20ml 生理盐水推完以后迅速的换4 度多聚甲醛20ml，灌完以后取材基本就可以了，
从你所说的情况看，
1、你推生理盐水时没有把血液冲洗干净
2、推的压力过大，将小的毛细血管冲破了
3、有血时可以用H2O2补救一下
4、双侧颈总动脉结扎的小鼠灌注时压力就更不能太大，要细水长流，一般正常的推注速度，没有阻力，就可以了，最好两个人合作一下比较好，我们这边灌注固定不论小鼠，大鼠的效果都很好。可以进一步交流
3.如位置正确会有白色液体从鼻孔流出
扎穿右心室才会有灌注液从鼻孔流出,这样浪费液体，灌注效果也不好
从心尖进，刺穿心室壁有漏空感即可,切不可盲目追求像大鼠一样深入升主动脉,剪开右心耳时小心伤到主动脉
要是冲血比较顺利的话，肝脏会迅速变白,如呈肉色再浅些就可以了,这是一个标志,冲血嘛,看着肝脏变化就差不多了,顺利的话一般30ml左右一定能冲的干净.
我们是拿0.01M PBS(pH=7.4)来冲血的,pH值一定要准确，否则老鼠会抽,还有就是麻药的问题，过浅过深都会影响灌注的效果.
开始冲血的液体，无论是PBS还是生理盐水,都要温热的，因为如果太冷,会使血管收缩痉挛,影响灌注效果，我一般都是调好pH值封好放到烤箱里过一夜.
灌注液是保存在4度的.
如果血实在是影响的话，可以拿0.3%双氧水30分钟处理一下
估计还是操作的问题，可以请教实验室的人带你做一次