实验一、啤酒花中芦丁的高效液相色谱法测定
1..实验目的
了解与掌握高效液相色谱法（HPLC）分析原理与基本操作方法。 2．实验药品与仪器
酒花超临界CO2 萃取后的萃余物 实验室自制；石油醚、甲醇（色谱纯）、乙醇、乙酸、芦丁标准品均购自北京化学试剂公司，超纯水购自娃哈哈公司；Waters 1525型高效液相色谱仪Waters 2487型UV检测器 美国； 超声波清洗仪 宁波新芝生物科技有限公司提供 真空旋转蒸发仪 上海申生科技有限公司提供。 3.实验方法
3.1.酒花中芦丁的提取步骤
准确称取1g酒花样品2份，用50%的乙醇溶液以1：20的料液比，在60℃下分别用超声波提取1h后离心4000转/分，15分钟，取上清液为酒花芦丁提取液，经0.45μm滤膜过滤后，用于HPLC分析。 3.2. HPLC测定芦丁的步骤
先用芦丁标准品制作标准曲线，再将样品溶液用微量进样器吸取10μl样品液进样分析,记录色谱峰，测定样品的芦丁峰面积,代入标准曲线的回归方程中计算相应的芦丁含量。
HPLC测定条件：C18柱(4.6mm×250mm)，流动相：甲醇-水-冰乙酸(40∶60∶2，V/V)；流速：1.0ml/min；柱温：室温，进样量：10μl；检测波长：280nm；灵敏度：0.05AUFS。
芦丁标准曲线制备方法：取芦丁标准品适量，用甲醇制成10ppm，20 ppm，40 ppm，60 ppm，80 ppm，100 ppm系列标准品溶液，分别进样，记录峰面积，
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以芦丁标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制芦丁标准曲线（计算回归方程为：Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981）。
芦丁的定性与定量分析：芦丁的定性分析根据芦丁标准品的保留时间确定，定量分析由芦丁标准品的标准曲线方法计算。芦丁含量结果表示为mg/g酒花 4. 实验结果
4.1芦丁标准曲线的制备
图1 芦丁标准品色谱峰
图2 芦丁标准曲线
表1 芦丁标准曲线测定数据
芦丁标准品浓
度
10
20
40
60
80
100
（μg/ml） HPLC峰面
94310.0 147600.0 308800.0 479500.0 679900.0 803400.0
2
积
4.2酒花提取液中芦丁的测定
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5. 结果与讨论
Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981
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