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华北农学报・２００８，２３（增刊）：２８２．２８５
灵芝多糖抑茵活性初探
白
丹，常适滔，李大海，刘继霞，尤雪颜
１１０１６１）
（沈阳农业大学农业部北方农作物病害免疫重点开放实验室，辽宁沈阳
摘要：通过热水提取法提取灵芝多糖，得到灵芝粗多糖，并以３种植物病原菌（胡萝卜欧氏菌、指状青霉、灰葡萄孢）和５种食品有害菌（蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、黑曲霉和黑根霉）为供试菌，采用纸片琼脂法来测定灵芝粗多糖对供试菌的抑菌强度。结果表明，灵芝粗多糖对植物病原菌中的胡萝卜欧氏菌有较强的抑制作用；对指状青霉菌有一定的抑制作用，但抑制作用较弱；对灰葡萄孢几乎没有抑制作用；对食品有害菌中的枯草芽孢杆和蜡状
芽孢杆菌有很强的抑制作用；对大肠杆菌和黑曲霉抑制作用相对较弱；对黑根霉几乎没有抑制作用。总体来看，灵芝
多糖对细菌的抑菌活性强于真菌。
关键词：灵芝多糖；抑菌活性；抑制作用中国分类号：￥５６７．３＋１
文献标识码：Ａ
文章编号：１０００—７０９１（２００８）增刊一０２８２—０４
ＡｎｔｉｂｌａｓｔｉｃＡｃｔｉｖｉｔｉｙｏｆＧａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ＢＡＩＤａｎ，ＣＨＡＮＧＮａｉ—ｔａｏ，ＬＩＤａ—ｈａｉ，ＬＩＵＪｉ—ｘｉａ，ＹＯＵＸｕｅ—ｙａｎ
（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｏｒｔｈＣｒｏｐ
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１０１６１，Ｃｈｉｎａ）
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灵芝（Ｇａｎａｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ）是一种重要的药用真
论依据。１
菌，属于非褶菌目、灵芝菌科、灵芝属…。灵芝多糖具有抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗衰老、降血糖等多种生物活性心。４Ｊ，目前国内外对于灵芝多糖的研究主要集中在抗肿瘤、抗氧化和提高机体免疫力等方面，对灵芝多糖的抑菌活性报道很少。本试验初步研究了灵芝多糖对植物病原菌及食品有害菌的抑制作用，以期探明具有活性的多糖类物质对各类微生物所具有的抑制作用和可能的作用途径，为其在食品防腐添加剂行业、病原菌无害化治理的应用提供理
收稿日期：２００７—０９—１７
材料和方法
１．１试验材料
灵芝：灵芝子实体购自沈阳市于洪区食用菌栽
培基地．系人工栽培赤芝。
菌种：胡萝卜欧氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、指状
青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｄ瑶ｉｔａｔｕｍ）、灰葡萄孢（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｃｉｌｑ，Ｂｒｅａ）、枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）、蜡状芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅＦｅｕｓ）、大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黑
基金项目：辽宁省科技攻关项目（００２０９００１）作者简介：白丹（１９８２一），女，辽宁鞍山人，在读硕士，主要从事真菌多糖研究。
通讯作者：常酒滔（１９６１一）．男．副研究员，博士，主要从事真菌多糖和植物分子病理学研究。
万方数据
增刊
白
丹等：灵芝多糖押茵活性初探
一－Ｃ２８３
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曲霉（山严诎碱妒ｒ）、黑根霉（鼢却班舭船）均
由本研究室提供。
ＰＤＡ培养基：马铃薯２００ｇ，葡萄糖２０ｇ，琼脂２０
ｇ，水１０００ｍＬ；牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏３ｇ，蛋
白胨１０ｇ，氯化钠５ｇ，琼脂２０ｇ，水１０００ｍＬ。
１．２试验方法
１．２．１
粗多糖的提取采用热水提取法。取粉碎
的灵芝子实体３００ｇ，用蒸馏水提取３次，用３层纱布过滤，合并滤液，离心除去残渣。滤液浓缩，向滤液中加入３倍体积的无水乙醇，冷藏过夜，５０００
ｒ／ｌＩｌｉｎ离心２０ｌｌｌｉｎ，收集沉淀，干燥得粗多糖［５，６｜。１．２．２供试菌种的活化及菌悬液的制备预先将６种供试菌种接入相对应的斜面培养基上进行活化，细菌置３７℃恒温培养箱中培养２４ｈ，真菌置２８℃恒温培养箱中培养４８ｈ，然后用血球计数板确定菌的浓度，用无菌水稀释，最终制成一系列菌悬液浓度约为１０８ＣＦｕ／ｍＬ（菌落形成单位，ｃＦＵ）备用。
１．２．３
灵芝粗多糖对供试菌的抑菌作用测定将
用水煮醇沉法得到的粗多糖粉沫配成１００——，ｇ／ｒｌｌＬ的
多糖溶液。抑菌效果的检测采用纸片琼脂法［ｎ９］：
用打孔器将定性滤纸加工成直径为６衄的圆形滤
纸片，放入干燥的平皿中，于１２１℃干热灭菌２０
ｌｌｌｉｎ
后，分别放入浓度１００ｍｇ／ｔｌｌＬ的多糖供试液和无菌
水中，浸泡１ｈ。
将已灭菌的固体培养基熔化后倒入平皿中，待冷却凝固后，分别倒人约０．４ｍＬ菌悬液均匀涂布于平板上，再用无菌镊子夹取浸有多糖供试液的滤纸片３片间隔一定距离贴在含菌平板上，并用浸有无菌水的滤纸片以相同操作为对照。每种菌３次重复，然后将各平皿倒置于恒温培养箱中，在适宜温度
下进行培养，取出，测量抑菌圈的直径。
１．２．４灵芝粗多糖对供试菌的最小抑制浓度（ＭＩｃ）
的测定
用两倍稀释法将灵芝多糖供试液稀释成浓
度为１００，５０，２５，１２．５，６．２５，３．１２５，１．５６３的系列浓度溶液，向平皿中分别移取不同浓度的稀释液各
１．０
ＩｌｌＬ，再分别移取各菌悬液０．２ｍＬ，倒人相应的、
温度在６０℃左右的固体培养基，充分混匀，待其完全冷却凝固后，倒置于恒温培养箱中在适宜温度下培养，每个浓度做２个重复观察，以处理培养基上无菌落生长的最低浓度为最小抑制浓度¨７｜。
２结果与分析
２．１灵芝粗多糖对植物病原菌及食品有害菌的抑
制作用
表ｌ表明，灵芝粗多糖对以上大部分供试菌有
万
方数据一日卟印Ｌ卜ｌ洲∞
一定的抑制作用，其对植物病原菌有较强的抑制作用，对胡萝卜欧氏菌和指状青霉的抑制效果较好，抑菌圈直径分别为８，６ｎ吼，对灰葡萄孢几乎没有抑制作用，对植物病原细菌的抑制作用强于真菌；灵芝多糖对食品有害菌的抑制作用也较好，尤其对枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌抑制作用很强，抑菌圈直径
分别为１１．７，１８．３胁，对真菌的抑制效果不显著，
其中对黑根霉和黑曲霉几乎没有抑制作用（图ｌ。
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灵芝粗多糖抑菌圈直径（衄）
Ｔａｂ．１
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灵芝多糖对胡萝卜欧氏菌的抑菌圈
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图２灵芝多糖对蜡状芽孢杆菌的抑菌圈Ｍｇ．２
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２８４
华北农学报２３卷
正面背面对照（ｃＫ）
正面
对照（ｃＫ）
图３灵芝多糖对枯草芽孢杆菌的抑菌圈
Ｆｉｇ．３
图４灵芝多糖对指状青霉的抑菌圈
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２．２
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灵芝粗多糖的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）
由表２可知，灵芝多糖对细菌确有较强的抑制
吲ｍＬ、大肠杆菌１００叫ｍＬ；相对细菌而言，灵芝粗
多糖对真菌的抑制作用不太显著，对指状青霉菌的ＭＩＣ值为１００ｍｇ／ｎ１Ｌ，对灰葡萄孢、黑根霉和黑曲霉的抑制效果很弱。
作用，其最小抑菌浓度ＭＩｃ分别为胡萝卜欧氏菌２５ｎ・ｇ／ｔｌｌＬ、蜡状芽孢杆菌２５ＩＩｌｇ／—ｌｌＬ、枯草芽孢杆菌５０
Ｔａｂ．２
表２灵芝粗多糖的最小抑菌浓度ＭＩＣ
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注：一．表示无菌生长；＋．表示有少量菌落生长；＋＋．表示有不超过ｌ／３平皿面积的菌落生长；＋＋＋．表示有不超过ｌ／２平皿面积的菌落生长；＋＋＋＋，表示有超过ｌ／２乎皿面积的大量菌落生长。
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一定浓度的多糖作用于真菌或细菌的细胞膜，破坏了真菌或细菌细胞膜的超分子结构而造成细胞内成分流失，导致菌体死亡。②由于微生物细胞壁上存在能与糖专一结合的糖基、蛋白［１７ｆ，它能使多糖高度聚集于菌体的表面，改变菌细胞的代谢活动，最终导致真菌或细菌的生长繁殖被抑制，甚至死亡。③在多糖存在的情况下，真菌或细菌的几丁质酶、葡聚糖酶等细胞壁降解酶活性被激发出来，导致对其自身细胞壁的破坏，外部物质渗进细胞内，破坏了菌细胞的完整性，菌体死亡。灵芝多糖对真菌和细菌抑制效果不同，可能是真菌和细菌的结构、代谢途径等
不同所导致。
多糖对各类微生物的生长有程度不同的抑制活性，或者说生长拮抗［１０。１４｜。但多糖抑菌作用的机制还不十分明确。杨惠麟等［１５］的研究认为，药物的抗菌作用，主要是抑制细菌或真菌细胞新陈代谢的某些环节或某些酶系统，依照这些代谢环节在机体生活机能上的重要程度不同，抗菌作用的效果也不同。如果重要代谢环节被抑制，则病原菌的生长就被阻碍甚至死亡。张文清等１１６Ｊ的研究认为，壳多糖能作用于病原菌细胞膜，改变流动性与通透性，并通过受损伤的细胞壁进入细胞内部进一步干扰病原菌的合成和代谢，从而达到对病原菌的颉颃作用。
本试验中灵芝多糖的抑菌作用机制，可能是：①
本研究所运用的是纸片琼脂法，初步测定了灵芝多糖的直接抑菌活性。该法的优点在于操作简
万方数据
－ＣＴ－
增刊
白
丹等：灵芝多糖抑茵活性初探２８５
－ＢＲＩＣＵＬＴＵＲＡＥ单、容易掌握、用多糖量少、短时间内能初步判断出多糖抗菌的广度和强度。研究表明，从灵芝中提取得到的灵芝粗多糖对植物病原菌和食品有害菌都有一定的抑制作用，但其抑菌活性还是相对较弱
的［１８ｌ。对于灵芝多糖抑菌活性是否与其结构相关，
还有待于进一步研究。参考文献：
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灵芝多糖抑菌活性初探
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
白丹， 常逎滔， 李大海， 刘继霞， 尤雪颜， BAI Dan， CHANG Nai-tao， LI Da-hai， LIU Ji-xia， YOU Xue-yan
沈阳农业大学,农业部北方农作物病害免疫重点开放实验室,辽宁,沈阳,110161华北农学报
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA2008,23(z1)4次
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