海藻酸钠在药物制剂中的研究进展
[摘要] 海藻酸钠是从海带或海藻中提取的天然多糖类化合物,作为缓释制剂辅料广泛应用于片剂、微丸、微囊、脂质体、纳米粒等缓释制剂中,现综述近年来海藻酸钠作为辅料的影响因素及在缓释制剂中的应用研究进展。
[关键词] 海藻酸钠;缓释制剂;辅料
[Abstract] Alginate is a naturalpolysaccharide polymer isolated from seaweeds oralgae, which is widely used as a sustained release excipient of tablets, pellets, microspheres, liposome and nanoparti cles. This paper reviewskey elements thatmake sodium alginate used as excipients aswellas recentpro gresses of sodium alginate used in sustained release formulation.
[Key words] alginate sodium; sustained release formulation; excipient
随着医药工业水平的发展,人们越来越青睐于使用天然产物。海藻酸钠是天然多糖类化合物,生物相容性好、毒性低,在长期的食品工业生产中已得到广泛的应用,如今在药学领域也展现出很高的应用前景,成为药物研究的又一热点。国内外将海藻酸钠应用于缓释制剂的研究报道有许多:如亲水凝胶骨架片、微球、微囊、脂质体、纳米粒等。现就近年来海藻酸钠作为缓释制剂辅料的影响因素及应用于各类药物剂型的研究进展作简要综述。
1 简介
海藻酸钠是从海带或海藻中提取的一种天然多糖类化合物,由古洛糖醛酸(G段)与其立体异构体甘露糖醛酸(M段)2种结构单元以3种方式(MM段、GG段与MG段)通过α(124)糖苷键链接而成的线性嵌段共聚物[1]。外观为白色或淡黄色粉末,几乎无臭,有稀释性,溶于水而形成黏稠胶体,不溶于乙醇和其他有机溶剂。海藻酸盐能在pH值较低时(即酸性介质环境下)与水或多价离子(如钙离子等)产生凝胶,利用海藻酸盐这种溶胀胶凝的特性,在工业生产中常被用作凝胶基质、增稠剂、稳定剂、膜材、水性阻滞剂等[2]。在食品生产上主要用做增稠剂、乳化稳定剂等。近几年,药用级海藻酸钠也在国内被广泛使用,如用于制备硫磺软膏、降压类药物制剂、磺胺类药物制剂等[3, 4]。安全性实验及大量研究表明海藻酸钠作为食品添加剂是极其安全的(FDA, 1985),其允许摄入量为0~25mg·kg-1·d-1(美国FDA/WHO),现已被美国药典收载用于制药工业,在制药工业中主要用作黏合剂、崩解剂和缓释材料。
2.海藻酸钠的性质
1)海藻酸钠为白色或淡黄色粉末,几乎无臭无味.
2)海藻酸钠易溶于水,糊化性能良好,加入温水使之膨化.吸湿性强,持水性能好,不溶于乙醇、乙醚、氯仿和酸(pH
3)海藻酸钠的稳定性以pH值在6~11之间较好.pH值低于6时析出海藻酸,不溶于水;pH值高于11时又要凝聚.黏度在pH值为7时最大,但随温度的升高而显著下降.
4)海藻酸钠不耐强酸、强碱及某些重金属离子,因为它们会使海藻酸凝成块状,但碱金属(钠、钾)并不会使海藻酸钠浆发生凝冻.
5)海藻酸钠水溶液遇酸会析出海藻酸凝胶,遇钙、铁、铅等二价以上的金属离子会立即凝固成这些金属的盐类,不溶于水而析出.
6)海藻酸钠低热无毒.海藻酸钠的种类很多,主要有:红藻、绿藻、褐藻类海藻(海带、马尾藻)等[5].
3 提取工艺
海藻酸钠典型的提取方法有几种[10],其中包括酸凝-酸化法、钙凝-酸化法、钙凝-离子交换法以及酶解法.下面简单地介绍一下前3种提取方法的工艺流程及基本原理.
3.1 酸凝-酸化法
该提取方法的提取过程如下:浸泡切碎消化稀释过滤、洗涤酸凝中和乙醇沉淀过滤烘干粉碎成品该提取方法的操作要点及原理如下:
1)浸泡.加10倍于海带重量的水,在常温下浸泡4 h,并加适量的甲醛,使甲醛溶液初始浓度 为1.0% ,将海带色素固定在表皮细胞中,不致因海带色素溶于水而导致产品色泽加深.同时,甲醛对植物细胞壁纤维组织有破坏作用,有利于消化过程中海藻酸盐的置换与溶出[11].浸泡结束后,取出海带,用水洗涤直至洗涤液为无色.
2)消化.将切碎的海带在一定温度下,加入一定浓度、一定体积的Na2CO3溶液进行消化.此过 程反应方程式如下:
2 M(Alg)n+nNa2CO3=2nNaAlg + M2(CO3)n
其中:M为Ca,Fe等金属离子;Alg代表海藻胶.
3)过滤.消化后,海带变成了糊状,比较黏稠.要先加入一定体积的水将糊状液体稀释,再过滤.由于直接抽滤这种糊状的液体速度太慢,因此首先用纱布初滤一次,再将滤液用真空泵抽滤.
4)酸凝.将过滤后的料液加水稀释,再往料液中缓慢加入稀盐酸直至开始有絮状沉淀为止,然 后静置8~12 h,最后往静置液中缓缓加入稀盐酸,调节pH值约为1~2,海藻酸即凝聚成酸凝块. 去清液,留下酸凝块.
此过程反应方程式如下:
NaAlg + HCl= HAlg↓+ NaCl
5)中和.在常温下,边搅拌边加入一定浓度的碳酸钠溶液溶解酸凝块,直至pH值为7.5,中和完 成.
此过程反应方程式如下:
2 HAlg + Na2CO3=2 NaAlg + H2O + CO2↑
6)析出海藻酸钠.往中和后的溶液中加入一定量的浓度为95%的乙醇,结果析出了白色的沉 淀.由于海藻酸钠易溶于水,不溶于乙醇,为了得到尽可能多的海藻酸钠产品,可以用乙醇将部分溶解在水中的海藻酸钠一并析出,这样可以提高提取率.最后经过滤、干燥、粉碎即可得产品.在此工艺流程中,酸凝的沉降速度很慢,需要8~12 h[10],而且胶状沉淀的颗粒也很小,不好过滤.生产的中间产物海藻酸不稳定,易降解,因此所得到的产品收率和黏度都比较低.
3.2 钙凝-酸化法
该提取方法的提取过程如下:浸泡切碎消化稀释过滤、洗涤钙析盐酸脱钙碱溶乙醇沉淀过滤 烘干粉碎成品该提取方法的其他步骤与酸凝-酸化法相同,只是有以下2步不同:
1)钙析.将滤液用盐酸调节至pH值为6~7,加入一定量10%的CaCl2溶液进行钙析. 此过程反应方程式如下:
2 NaAlg + CaCl2=Ca(Alg)2↓+ 2NaCl
2)盐酸脱钙.将钙凝得到的海藻酸钙经水洗除去残留的无机盐类后,用一定体积的10%左右的稀盐酸酸化30 min,使其转化为海藻酸凝块.去清液,留下酸凝块.
此过程反应方程式如下:
Ca(Alg)2+ HCl= 2HAlg↓+ CaCl2
在此工艺流程中,钙析的速度比较快,沉淀颗粒也比较大.但在脱钙过程中,由于采用盐酸洗脱 的方式,生产的中间产物海藻酸不稳定,易降解.因此所得到的产品收率和黏度都不是很高.
3.3 钙凝-离子交换法[12]
该提取方法的提取过程如下:浸泡切碎消化稀释过滤、洗涤钙析离子交换脱钙乙醇沉淀过滤烘干粉碎成品该提取方法的其他步骤与钙凝-酸化法相同,只是采用了离子交换脱钙,即将钙析后的产品过滤后,再往里加入一定量浓度为15%的NaCl溶液脱钙.
此过程反应方程式如下:
Ca(Alg)2+ NaCl =2NaAlg + CaCl2
利用交换生成的海藻酸钠,由于盐析作用而不溶于交换液中,仍为絮状凝胶,最后经过滤、干 燥、粉碎即得成品海藻酸钠.在此工艺流程中,钙析的速度比较快,沉淀颗粒也比较大.采用离子
交换脱钙法所得的产品收率较高,已达42.6%;黏度已达2 840 mPa·s[13],高于目前国际上工业产品黏度( 150 ~1 000 mPa·s),而且所得产品均匀性好,储存过程中黏度稳定.
4. 作为缓释制剂辅料的影响因素
海藻酸钠作为一种缓释制剂辅料受自身[相对分子质量、甘露糖醛酸(M)和古洛糖醛酸(G)的比值(M/G值)]和外界(介质pH值,阳离子及阳离子化合物)两方面因素的影响。 4 .1 相对分子质量
海藻酸盐种类繁多,其结构的不同主要取决于提取物生长的海域及采集的季节的差别。海藻酸盐应用较多的是其钠盐,钠盐的相对分子质量在7×104~15×104[2, 5]。海藻酸钠的相对分子质量对缓释作用的影响较大,其相对分子质量与释药速度之间有良好的线性关系,海藻酸钠的相对分子质量越大,黏度越大,释药速度越慢。
4. 2 M /G值[6]
海藻酸钠作为缓释制剂的载体,M/G值影响缓释作用。Akihiko等[7]在研究相对分子质量较小模型药物时,结果显示M/G值越大,释放速度越快。
4. 3 介质的pH值
海藻酸钠作为缓释制剂的骨架材料受介质的pH值影响大[8, 9]。在偏酸性介质(即介质pH值较小)条件下,海藻酸钠能形成难溶性凝胶骨架,药物在海藻酸钠难溶性凝胶骨架中的释药速度缓慢,酸性越强,释药速度越慢;当介质pH值为中性逐渐至碱性时,海藻酸钠凝胶骨架的溶解速度加快,药物的释药速度明显加快,很难达到缓释效果
4. 4 阳离子的种类及浓度
海藻酸钠为阴离子型化合物,遇阳离子如钙离子、铝离子等产生凝胶层,阻滞药物释放,从而达到药物缓释作用。Nokhodchi等[10]研究发现,在离子浓度较低时,活性高的铝离子比钙离子与等摩尔的海藻酸钠结合快,因此产生凝胶屏障的时间短,药物释放速度变缓趋势明显;但当离子浓度高于某一特定值时,钙离子能与海藻酸钠产生更强的缓释效果。
5 在缓释制剂中的应用
5. 1 片剂
海藻酸钠由G段与其立体异构体M段2种结构单元以3种方式(MM段、GG段与MG段)通过α(124)糖苷键链接而成线性嵌段共聚物[1], 3种方式M/G比值影响聚合度与缓释效果[2],此特点应用于药物制剂的研究中能使不同物化性质的药物在体内更好吸收,提高药物的生物利用度。对于pH值依赖型药物,为延长药物在胃中的吸收时间,利用海藻酸钠在胃液环境(酸性介质环境)下形成凝胶层的特点, Tonnesen等[2]报道用海藻酸钠与羟丙基甲基纤维素(HPMC)制成的胃漂浮控释小片胶囊(无需另外添加Ca2+与产气物),可以延长药物在胃中的滞留时间,增大pH值依赖药物的吸收窗,提高药物生物利用度。海藻酸钠是阴离子化合物,能与壳聚糖这种阳离子化合物形成复合物骨架[11],此骨架受介质pH值的影响很大。蒋新国等[8]研究表明,将海藻酸钠与脱乙酰壳聚糖制成聚离子复合物能避免此缺陷,当两者的质量比例为1∶1或3∶2时,制得的海藻酸钠脱乙酰壳聚糖混合骨架片在人工胃液和人工肠液中的释药规律相似。根据上述原理利用海藻酸钠与壳聚糖为缓释基质制得的pH非依赖性缓释口服制剂盐酸奈福泮片,使药物在体内的释放不因所处胃肠道的pH值不同而发生变化,即在胃肠道中有相似的释放速率,达到良好的体内外相关性,同时减少了药物释放的个体差异
[12]。水难溶性药物在溶出介质中溶出速率很低,通常很难达到较高的生物利用度。相对分子质量小的海藻酸钠在少量使用的情况下有促进崩解的作用。在片剂中使用相对分子质量小的海藻酸钠能促进水分更快地进入片芯,促进药物释放[13]。不同相对分子质量的海藻酸钠的黏度不同,相对分子质量大的黏度大,且易黏附在湿润组织上。利用海藻酸钠无毒且黏性优良的特点,将其应用于口腔黏膜疾病或黏膜给药中可避免首过效应,提高生物利用度。Miyazaki等
[14]研究使用不同比例海藻酸钠与壳聚糖制备地尔硫舌下片,体内外实验结果显示黏附片在
几秒内即可黏附黏膜组织,黏附力持久(>1 h),生物利用度从口服给药的30. 4%提高到了69. 6%。
5. 2 微丸
使用海藻酸钠制得海藻酸钙凝胶微丸[15],通过调节海藻酸钠的浓度、钙离子的浓度和水量,可使形成的难溶性凝胶具有溶胀pH敏感性。且制备海藻酸钠凝胶微丸不需要有机溶媒,适合多种模型药物[15, 16]。研究表明,以难溶性药物布洛芬作为模型药物,采用不同浓度氯化钙溶液滴注于海藻酸钠溶液中交联后形成布洛芬凝胶小丸,通过调节钙离子浓度得到较适宜的粒径,干燥后用水反复冲洗,整粒即得含药微丸,含水难溶性药丸经过反复水洗后比水溶性药物成丸含药量高,因此尤其适合药物剂量大的水难溶性药物如氨苄西林成丸[17]。方法简便、无污染,通过优化工艺减少水反复冲洗次数可得到较高收率。
5. 3 微囊
海藻酸钠带负电,能与带正电荷的高分子化合物如壳聚糖通过静电作用形成微囊。这种载体对包封在微囊中的不同电性的药物具有不同的包载能力。李沙等[18]研究结果显示,海藻酸钠2壳聚糖形成的载体对于带正电与负电的药物均具有较高的包封率,而对于电中性的药物包封率较低。这种静电作用成囊机制较适合于生物制品制剂如多糖抗体、卡介苗、胰岛素、水蛭素等的制备。多肽类药物易被胃消化酶水解失活,因而减少多肽类药物在胃中的释放能够提高其生物活性。王康等[1]研究报道胰岛素、水蛭素等多肽类药物包埋在海藻酸钙2壳聚糖微囊中,在模拟胃液中没有明显的释放,而在肠液中释药较快,从而使药物减少了在胃中水解失活,有效提高多肽类药物的生物活性与利用率[19]。
5. 4 脂质体
Hara等[20]通过研究海藻酸钠与钙离子的作用,采用海藻酸钠、磷脂、氯化钙为主要处方成分的新方法制备了海藻酸钠脂质体。制备方法使用质量浓度10mg·mL-1海藻酸钠与钙黄绿素溶液分散磷脂膜,再将混悬液冷冻干燥复溶,重复3次,超声(10 s),离心(7 000 r·min-1, 20min),将收集到的脂质体混悬于氯化钙溶液中, 4℃下放置使钙离子进入脂质体中与海藻酸钠作用形成凝胶,从而减缓药物释放。这种脂质体的特点在于当有钙离子存在时达到缓释作用,在钙离子鳌合剂的作用下又能加快释放,其原因是由于钙离子进入脂质体后与阳离子化合物海藻酸钠结合形成凝胶,使药物透过磷脂膜的速度减慢,当加入钙离子鳌合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)时,减少了钙离子的量而减少了凝胶的形成,加快了药物的释放。选用多种模型药物进行体外释药试验时发现,生长因子、生长抑止剂等生物活性分子为水溶性且相对分子质量小的蛋白质类药物,制备海藻酸钠脂质体可使释药稳定,无突释,显示较好的体外释药行为,且受外界离子环境(如EDTA)影响小。
5. 5 纳米粒
采用海藻酸钠与阳离子化合物相结合制备新型纳米粒已有研究。Rajaonarivony等[21]采用低于预胶化浓度的海藻酸钠与氯化钙溶液混合搅拌,再加入质量浓度为5mg·mL-1L2聚赖氨酸溶液,通过控制钙离子的浓度制得平均粒径为250 nm的多柔比星海藻酸钠纳米粒,通过实验考察比较,此方法制得的纳米粒的载药量明显优于液中干燥法和自动乳化法[22]。胰岛素为蛋白类不稳定药物,纳米粒作为药物载体可使胰岛素不受蛋白水解酶的影响,因此纳米粒以其药物包封率高、稳定性强及体内特异性分布等特点,是研究多肽和蛋白质类药物新型给药系统的一个重要组成部分。袁弘等[23]研究表明,胰岛素等多肽和蛋白质类药物可采用多糖(海藻酸钠与壳聚糖)为药物载体制备纳米粒,在纳米粒形成过程中,海藻酸钠溶液与胶体成型之间的质量浓度存在一个临界点,在该临界区域制备能获得较高包封率的纳米粒,这为研究和开发多肽、蛋白类药物提供了新方法。Finotelli等[24]还使用海藻酸钠研制出了磁靶向纳米粒制剂,研究表明Fe3+可以取代Na+进入载体骨架结构,使纳米粒具有磁靶向性,这为药物达到特定病灶部位提供了重要的前提。海藻酸钠作为纳米粒药物新剂型的载体有很高的应用前
景。
5. 6 原位凝胶
原位凝胶[25]是随着药用高分子材料学的发展而产生的新剂型,是指以溶液状态给药后立即在用药部位发生胶凝,从而形成非化学交联的半固体制剂。在体凝胶具有凝胶制剂高度亲水性的三维网络结构及良好的组织相容性,近年来已经引起各国学者的广泛关注,成为药剂学领域的研究热点之一。Cohen等[26]将海藻酸钠应用于原位凝胶眼部给药系统,也取得了良好的疗效。海藻酸钠作为优良的制备原位凝胶的辅料,利用其遇水溶胀胶凝的特性,应用于眼部给药系统,给药后海藻酸钠遇水迅速胶凝并吸附在眼睑周围,能够增加药物与眼部组织的接触面积,提高药物在眼部的黏附力,减少药物有效成分在泪液作用下流失,明显延长药物的治疗时间,并且改善眼部给药的不适感,提高了患者的顺应性,为眼部给药新剂型的发展提供了新方法。海藻酸钠作为一种优良的制备原位凝胶的辅料,不仅可以应用于眼部给药等外用制剂,同样可以应用于制备多种剂型。Shozo[27]报道有运用原位凝胶的机制利用海藻酸钠制成茶碱口服液体缓释制剂,并在大鼠体内进行吸收行为的研究,结果显示制剂在体外呈液体状,进入胃内遇胃酸性环境后胶凝,在适宜的胶凝强度下形成原位凝胶,延缓药物的释放,维持期长达6 h,改善了药物的吸收行为,大大了提高生物利用度[28]。运用海藻酸钠制备原位凝胶使药物在用药部位能持续释放,药物扩散与凝胶内部的微黏度有关,药物释放主要受凝胶溶蚀的控制,符合零级动力学过程,不受药物性质影响,其机制还需进一步探讨。
6 展望
如今,天然化合物以其良好的生物相容性和生物可降解性越来越受到人们的重视,应用于医药卫生制品到食品添加剂的各个领域。在医药行业的发展过程中,研究开发新型药用辅料,将天然聚合物应用于处方设计中将会是一个很重要领域。药用辅料的发展在整个制剂技术发展过程中起到关键的作用。我国地大物博,天然海洋资源丰富,海藻酸盐的产量更居于世界前列,并广泛应用于食品化工领域,但与国外相比,海藻酸钠作为药用辅料的潜能还没有完全开发出来,因此,伴随新辅料的推广应用研究,科研水平的不断提高,海藻酸钠这类天然化合物在片剂、脂质体、纳米粒、微丸、微囊等众多剂型的研究会更加深入,并不断拓展其应用范围,海藻酸钠药用辅料的开发必将有广阔的市场前景。
[ 参 考 文 献 ]
[1] 王康,何志敏.海藻酸微胶囊的制备及在药物控释中的研究[J].化学工程, 2002, 30(1): 48-54.
[2] TONNESENHH,KARLSEN J.Alginate in drug delivery systems[J].DrugDev
IndPharm,2002, 28(6): 621-630.
[3] 崔福德.药剂学[M].北京:中国医药科技出版社, 2002: 484-491.
[4] 罗明生,高天惠.药剂辅料大全[M].成都:四川科技出版社,1992: 605-607.
[5] 蒋新国,王俊,朱芳海,等.海藻酸钠的分子量与缓释作用[J].药学学报, 1994, 29(4): 306-310.
[6] 马萍,孙淑英,刘东春,等.海藻酸钠理化参数的测定[J].中国海洋药物, 2003, 75(3): 56-62.
[7] AKIHIKO K,MINAKO K,ATSUSHIW,et al.Effect ofCa2+2alginate geldissolution on release ofdextranwith differentmolec2ularweights[J].JControlled Release,1999, 58(1): 21-28.
[8] 蒋新国,何继红,奚念朱.海藻酸钠和脱乙酰壳多糖混合骨架片剂的缓释特征性研究[ J].中国药学杂志, 1994, 29(10):610-612.
[9] PEPPERMAN AB, KUAN JCW. Alginate controlled release for2mulation
ofmelrivuzin[J].JControlled Release,1991, 19(1):105-111.
[10] NOKHODCHIA, TAILOR A. In situ cross2linking of sodium alg2inatewith calcium and aluminum ions to sustain the release oftheophylline from polymeric matrices[ J].Farmaco,2004,
59(8): 999-1004.
[11] TAPIA C,ESCOBAR Z,COSTA E,etal.Comparative studies onpolyelectrolyte complexes and mixtures of chitosan2alginate andchitosan2carrageenan as prolonged diltiazem clorhydrate releasesystems[J].EurJPharm Biopharm,2004, 57(1): 65-75.
[12] 路兵,石庭森. pH非依赖性释放缓释片的研制[J].中国药学杂志, 1999, 34(12): 812-815.
[13] HODSDON AC,MITCHELL JR, DAVIESMC,et al.Structureand behaviour in hydrophilic matrix sustained release dosageforms: 3. The influence of pH on the sustained2release
perform2ance and internal gel structure of sodium alginatematrices[J].JControlled Release,1995, 33(1): 143-152.
[14] MIYAZAKI S, NAKAYAMA A. Drug release from oralmucosaladhesive tablets of chitosan and sodium alginate [ J].Int JPharm,1995, 118(2): 257-263.
[15] YOTSUYANAGIT.Calcium induced gelation of alginic acid andpH2sensitive reswelling of dried gels[ J].Chem Pharm Bull,1987, 35(9): 1563-1571.
[16] KAKKAR AP.Characterization of ibuprofen loadedmicrocapsulesprepared by ionotripie gelation[J].Indian JPharm Sci,1995,57(2): 56-65.
[17] ANALAK, STEVENSWF.Chitosan2alginatemultilayer beads forcontrolled release of ampicillin [ J].Int J Pharm,2005, 290(1): 45-54.
[18] 李沙,李馨儒,侯新朴.海藻酸钠2壳聚糖微囊的制备及载药性质的研究[J].中华临床医药, 2002, 14(3): 1-3.
[19] CHANDY T,MOORADIAN DL, RAO GHR,etal.Chitosan/po2lyethylene
glycol2algiatemicrocapsules for oraldelivery ofhirudin[J].JApplPolym Sci,1998, 70(9): 2143-2153.
[20] HARAM, MIYAKE J. Calcium alginate gel2entrapped liposomes[J].MaterSciEng,2001, 17(1): 101-105.
[21] RAJAONARIVONY M.Development of a new drug carriermadefrom alginate[J].JPharm Sci,1993, 82(9): 912-917.
[22] WAYNE R,GOMBOTZ, SIOW FONGWEE. Protein release
fromalginatematrices[J].AdvDrugDelivRev,1998, 31(1): 267-285.
[23] 袁弘,胡富强,应晓英,等.胰岛素纳米粒的制备[J].中国药学杂志, 2002, 37(5): 349-352.
[24] FINOTELLI PV, MORALES MA, ROCHA2LEAO MH,et al.Magnetic studiesof iron(III) nanoparticles in alginate polymer fordrug delivery applications[ J].Mater Sci Eng,2004, 24
(6):625-629.
[25] 魏刚,徐晖,郑俊民.原位凝胶的形成机制及在药物控制释放领域的应用[J].中国药学杂志, 2004, 38(8): 564-568.
[26] COHEN S.A novel in situ2forming ophthalmic drug delivery sys2tem from alginate undergoing gelation in eye[J].JControlledRe2lease,1997, 44(2): 201-208.
[27] SHOZO M. Oral sustained delivery of theophylline using in2situgelation of sodium alginate[ J].J Controlled Release,2000, 67(2): 275-280.
[28] CHIEN YW. Noveldrug delivery systems[J].DrugsPharm Sci,1999, 50(1): 229-231.