万方数据
试验研究
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图1莱克多巴胺浓度--百分吸光度标准曲线图
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色产物。加终止液后，颜色由蓝色转变为黄色。在单波长450nm 处测吸光度，吸光度值与样品中的莱克多巴胺含量成反比
。
2.2.1猪尿取10mL 猪尿尿样过滤或离心至清亮。
猪肉称取粉碎的5g 猪肝或猪肉样品2.2.2猪肝、
振荡1.5h ，与25mL50mmol/LHCL混合，以达到均质
的目的。称取6g 均质物，加入离心管中。10～15℃条件下4000转/min离心15min 。转移上清液到另一个
加300μL1mol/LNaOH混合15min 。加入离心管中，
4mL500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH3.0），简单混合并在4℃保存至少1.5h 。10～15℃条件下4000转/min离心15min ，分离全部上清液，使其升至室温
然后用RIDAC18柱纯化。（20～24℃），
RIDAC18柱纯化样品必须在室温条件下（20～24℃），并严格控制过柱时流速。用3mL 甲醇洗涤柱子使其活化，控制流速为1滴/s。用2mL 洗涤液
，洗涤柱子。（pH3.0的50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液）
分离的全部上清液进柱，控制流速为1滴/4s。用2mL 洗涤液（pH3.0的50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液），洗涤柱子，流速为1滴/s。用正压除去残留的流体并用空气或氮气吹2min ，干燥柱子。用1mL 甲醇洗脱样品，控制流速为1滴/4s。在50～60℃并在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇溶剂。用1mL 蒸馏水
取20μL 进行分析
。溶解干燥的残留物，
所有试剂及样品在开始检测前必须回升至室温
（19～25℃），测定操作在19～25℃下进行。
用盒中缓冲液按试剂盒的规定和实际需用量稀
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释莱克多巴胺抗体浓缩液和莱克多巴胺酶标记物浓缩液，稀释前轻轻混匀抗体浓缩液、酶标记物浓缩液
不要猛烈振荡，避光放置。和缓冲液，
取出实验需要数量的微孔板条，足够标准和样品所用的数量，标准和样品做两个平行试验，记录标准和样品的位置。剩余的微孔板条放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，置于2～8℃冷藏。
每个微孔中加入100μL 抗体稀释溶液，轻轻振
室温动酶标板，使抗体液混合均匀，用封口膜封好，
（20～24℃）孵育微孔板15min ，避免光线照射。
洗板，用洗板机洗涤酶标板，用250～300μL 洗涤缓冲液充入孔中，洗涤，重复操作3次。加洗涤水的移液器管尖必须置于微孔上方约0.5cm 处打出洗
避免将板孔中的游离抗体带入洗涤水中。洗板涤水，
后立即进行下一步操作，不要让板孔干燥。
用移液枪吸取20μL 标准溶液或处理好的样品分别加入到指定的每个微孔中，标准和样品均溶液，
需做两个平行孔实验。然后加入100μL 酶标记物，用密封胶纸盖好酶标板，轻轻振荡板边缘并在桌面上作圆周运动以混匀，置于室温（19～25℃）孵育30min ，避光放置，每隔10min 轻轻振荡1次。
洗板，用洗板机重复洗板3次。
用8道移液枪移取100μL 酶基质/发色剂到每一孔中，轻轻震荡微孔板并在桌面上作圆周运动以混匀，在19～25℃孵育20±2min ，加入100μl0. 2M 硫酸中止反应，反应物颜色由蓝色转为黄色，10min 内用酶标仪测量450nm 波长的吸光度值。3试验结
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畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
邱建琴， 左晓磊
河北省石家庄市畜牧水产局,石家庄,050000
畜牧兽医科技信息
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY MEDICINE2010(5)1次
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