Vol.25 No.4第25卷第4期河北医科大学学报
2004年7月July 2004JOURNALOFHEBEIMEDICALUNIVERSITY
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・论 著・
比色法测定荷叶中总黄酮的含量
樊淑彦,曹晓芳,刘淑萍,侯海妮,冀国荣
(河北医科大学药学院分析化学教研室,河北石家庄050017)
【摘要】 目的利用黄酮类化合物可与金属离子形成有色螯合物的机理,用比色法测定荷叶中总黄酮的含量。方法KAc2AlCl3体系与荷叶总黄酮提取物反应,用比色法测定其结果。结果用KAc2AlCl3体系络合化学吸光法测定荷叶中总黄酮的含量为5.08%,平均回收率为101.2%,RSD=2.41%(n=5)。结论KAc2AlCl3体系络合化学吸光法易推广,呈色稳定,干扰小,容易掌握。
【主题词】 比色法;莲;黄酮
【中图分类号】 R282.71 【文献标识码】 A 【文章编号】 100723205(2004)0420215203
MEASUREMENTOFTOTALFLAVONECONTENTSINLOTUSLEAFBYETRY
FANShu2yan,CAOXiao2fang,LIUShu2pingHaiI(DepartmentofChemicalAnalysis,theSchoolHebei,
Shijiazhuang)
ABSTRACT:ObjectiveTototalflavoneinlotusleafbycolorimetrythatutilizethefactcompoundswithmetalironcanformcolourfulareactionbetweentheextractionoftotalflavoneinlotusleafandthesystem23,determinedbycolorimetry.ResultsTheaveragecontentoftotalflavoneinlotusleafis%,withanaveragerecoveryof101.2%andrelativestandarddeviationof2.41%.ConclusionThismethodissimple,easytolearn,andwithgoodreproducibility.
MeSH:colorimetry;Nelumbonucifera;Flavone
荷叶为睡莲科植物莲的干燥叶,分布于我国的
大部分地区。1991年11月中华人民共和国卫生部卫监发(1991)第45号文件中,荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”的名单之中,荷叶在食用及药用两方面均有较广泛的应用。在荷叶的众多化学成分中黄酮类化合物具有明显的生物活性和生理功能,具有抗氧化、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂等药用保健功能[1,2]。因黄酮类化合物能与金属离子形成稳定的呈色螯合物,选择合适的络合体系测定荷叶黄酮的含量,对荷叶的开发利用有重要意义。本文采用以芦丁为对照品,应用KAc2AlCl3络合体系测定其含量。
1 实验仪器及试剂
日本岛津UV22100紫外分光光度仪,芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供),95%乙醇,石油醚,2.5%AlCl3,1%KAc(均为分析纯)。2 实验方法和结果
2.1 测定方法依据:以芦丁为对照品测定荷叶中总
黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜的pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物在可见区能获得稳定的特征吸收峰。2.2 最佳比色条件的选择:取供试品适量,以吸光度值为指标,做正交实验。参加实验的因素有A:1%KAc,B:2.5%AlCl3,C:放置反应时间(每个因素所取的水平见表1)。通过正交试验确定最佳显色条件为A2B1C1,即1%KAc5.0ml,2.5%AlCl33.0ml,30min,结果见表2。
[收稿日期]2003207210;[修回日期]2004203220
[作者简介]樊淑彦(1957-),女,河北藁城人,河北医科大学药
学院副教授,从事药物质量标准建立的研究。
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表1 实验因素水平
河北医科大学学报 第25卷 第4期
表3 样品总黄酮的含量测定
Table3 Contentdeterminationoftotalflavoneinlotusleaf
C(t/min)
3035Experimentnumber
12A0.5200.526%5.065.11Average(%)
5.08
RSD(%)0.52
Table1 Experimentfactorlever
Lever12A(v/ml)3.05.0FactorB(v/ml)3.04.02.6 精密度试验:精密称取荷叶适量,按样品项下
表2 正交试验设计和结果
Table2 Orthogonalexperimenttableandresults
Experiment
number
12345678K1jK2jK3jLinenumber
1111222330.3410.4480.[1**********]20.3900.3560.[1**********]10.4220.4120.281A0.4420.3510.2300.5290.4140.5210.1980.304---方法制成样品液,同上述含量测定方法平行测定5次,结果见表4。
表4 精密度试验
Table4 Precisionexperiment
Experimentnumber
1234A0.5180.5230.5240.514%5.045.095.105.00RSD(%)
0.81
2.7 加样回收率:精密称取已知含量的荷叶适量,
加入一定量的芦丁对照品品液,,计算回收%,(n=5),结果见表表5 回收率试验
Table5 Recovryexperiment
ExperimentAdditionof
numberrutin(v/ml)
12340.30.40.50.6A0.4400.4640.4840.5042.3 样品溶液的制备:干荷叶粉碎后,过60目筛,
精密称定1g,以1∶25和1∶15固液比的50%水溶液浸泡,加少许碳酸钙,称重降,在沸点回流两次(,,再次称重,补足重量,,3次,将下层乙醇液放出至量瓶中供分析用[3]。
2.4 标准品溶液的制备:精密称定干燥至恒重的芦
ΔA
0.067
0.0910.1110.131%99.8102.2100.298.7Average(%)
RSD(%)
101.22.41
丁对照品20.06mg,置100ml量瓶中,加60%乙醇适量,超声使完全溶解,稀释至刻度,摇匀。精密量取25.00ml置50ml量瓶中,用水稀释至刻度(含芦丁10.03mg/ml),备用。2.5 测定方法和结果
2.5.1 测定波长的选择:取标准品适量,加5.0ml1%KAc,摇匀,再加3.0ml2.5%AlCl3,放置30min,以试剂为空白参比,于300～600nm范围内扫
2.8 稳定性试验:精密称取荷叶适量,按样品项下
方法制成样品液,同上述含量测定方法测定,样品溶液在1h内吸光度值变化不明显,结果见表6。
表6 样品总黄酮的稳定性试验
Table6 Stabilityexperimentoftotalflavoneinlotusleaf
Time(t/min)
5102030A0.5210.5200.5180.512RSD(%)
1.61
描,在414.2nm处有最大吸收,故选择此波长测定。
2.5.2 标准曲线的绘制:分别精密吸取芦丁对照液0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于25ml量瓶
3 讨 论
荷叶黄酮本身有色,紫外扫描后在400nm以上无吸收,KAc2AlCl3体系络合化学吸光法的最大吸收波长在414.2nm处,无干扰,且操作简单、呈
色稳定、容易掌握,可以测定荷叶总黄酮的含量。
文献报道用NaNO22Al(NO3)2NaOH体系络合化学吸光法测定荷叶总黄酮的含量[3],考虑到黄酮结构在NaOH中稳定性差,且操作繁琐,故本文采用KAc2AlCl3体系,结果稳定,为在实验条件有限的
中,用60%乙醇稀释至5ml,分别加入5.0ml1%KAc,摇匀,再加3.0ml2.5%AlCl3,放置30min,以试剂为空白,得回归方程A=0.0257C+0.0005,r=0.9997(n=5)。
2.5.3 样品总黄酮的测定:从样品液中精密吸取0.2ml到10ml量瓶中,自加入5.0ml1%KAc起
按标准曲线下操作,测A值,结果见表3。
樊淑彦等 比色法测定荷叶中总黄酮的含量
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情况下初步测定荷叶中总黄酮含量提供参考依据
(如有条件仍建议用HPLC测定其含量)。
以芦丁为对照品来定量荷叶提取物中的总黄酮还不够科学,因为荷叶提取物中含多种黄酮成分并发挥综合的药理作用,如果有较多的对照品可分别定量,则该法会更完善。
【参考文献】
[1] 许蜡英,毛维伦,江向东,等.荷叶降血脂开发研究[J].湖北中
医杂志,1996,18(4):42243.[2] 彭芳.黄酮类化合物的生物学作用[J].大理医学院学报,
1998,7(4):52254.[3] 黄阿根,钱建亚,谭道经,等.荷叶黄酮提取工艺研究[J].食品
与机械,2000,14(5):14215.
・病例报告・
肺复张后肺水肿6例
曹利娟,任迎春,张进华,张力克
(河北医科大学第三医院胸外科,河北石家庄050051)
【主题词】 肺不张/并发症;肺水肿;诊断
【中图分类号】 R563.4 【文献标识码】 C 【文章编号】 100723205(2004)0420217201 临床对肺不张这一并发症已有了有效的治疗和预防办法。但对肺复张后肺水肿认识不足,本文报告6例各种原因所致肺复张后肺水肿。
1 临 床 资 料
1.1 一般资料:本组6大有关[1]。本文6、肺顺应,、肺功能损伤减,。6例中有3例肺,另还有外在因素。总体:①肺萎陷:6例中均有肺萎陷经过。各种,在肺突然复张后均有造成复张后肺水肿的可能。有报道肺萎陷3d以上者易造成。但6例中有1例肺萎陷2h,1例肺萎陷4h,可见短时间的肺萎陷也可发生肺复张后肺水肿。②肺损伤:麻醉时肺萎陷时间较长、正压通气过快、压力较大可造成肺组织的损伤,6例中有2例如此。③肺不张:反复发生肺不张使肺泡组织结构损害从而导致肺间质水肿,6例中有1例是术后发生肺不张纤维支气管镜吸痰后发生。从以上原因看对于肺受压者迅速解除造成肺不张的因素有一种潜在的危险,既肺血管的损伤[2]。这个损伤可以是肺不张本身及再扩张肺组织对毛细血管的机械压迫所致。另外肺灌注迅速增加对肺毛细血管也是机械性压力[2];肺血管受到机械性压迫,而复张过程中肺血管受到牵引、伸展和扭曲,从而损伤了血管内皮细胞导致通透性增强,致使肺泡水肿液中蛋白含量增加,大量液体漏出进入间质和肺泡内,加重了小气道阻力,可重新使肺泡萎陷。可见机械性损伤可能是造成肺泡毛细血管壁通透性增加的诱发因素[1]。另肺萎陷可使肺泡表面活性物质缺乏、肺泡表面张力增高,从而有再度肺萎陷可能。
肺复张后肺水肿的预防:①肺复张时和复张后常规吸氧。②麻醉师单侧肺通气时要掌握好时间、复张时的速度,所给压力亦缓、平。③高危患者肺复张后要密切观察。
严重的肺复张后肺水肿的治疗同肺水肿,较轻的治疗进行对症处理即可。【参考文献】
[1] 吴观生,罗先达,冉鹏,等.开胸术中发生复张性肺水肿四例
[J].中国胸心外科临床杂志,1999,6(2):127.
[2] PavlinDJ.Lungreexpansion2forbetterorworse[J].Chest,1986,
89(1):223.
气后2例,15发生1例,h30
min后1例,3d纤维支气
管镜吸痰后1例,4
d调整胸璧加压包扎25min后发生1例。年龄16～68岁,
平均47.5岁。6例中2例为肺受压不张手术复张后发生肺水肿;2例为胸部手术麻醉单侧阻断通气后出现肺水肿;1例为痰液堵塞支气管致肺叶不张纤维支气管镜吸痰肺复张后肺水肿。发生肺水肿前总输液量均
～130次/min),肺听诊患侧可闻及中小水泡音,咯粉红色泡沫样痰;另几例表现呼吸急促、大量白色泡沫样痰,并有心率增快(120次/min),患肺可闻及湿性罗音;X线胸片显示患肺可见斑片状密度增高阴影。诊断依据病史、典型症状、体征、X线胸片即可作出。
1.3 治疗结果:此症治疗方法如仅在X线胸片有小斑片状
密度增高阴影则无需特殊处理,经一般治疗后病变可吸收、消散。较重者治疗方法同肺水肿。本文6例均治愈。
2 讨 论
肺复张后肺水肿是一种非心源性肺水肿,其发生与肺萎陷时间、有害物质增多、肺表面活性物质减少及胸腔负压过
[收稿日期]2004206202;[修回日期]2004207206
[作者简介]曹利娟(1961-),女,河北石家庄人,河北医科大学
第三医院副主任医师,副教授,医学学士,从事胸外科疾病诊治研究。