中华流行病学杂志2001年8月第22卷第4期 ChinJEpidemiol,August2001,Vol.22,No.4
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#论著#
2型糖尿病危险因素的多因素logistic回归分析
鲁一兵 缪珩 王华 何戎华 金卫新 华子春
=摘要> 目的 探讨多种因素与2型糖尿病发生的关系。方法 对南京地区汉族106例2型糖尿病患者和102例正常对照者解偶联蛋白3(UCP3)、激素敏感脂酶(HSL)和蛋白酪氨酸磷酸化酶1B(PTP-1B)基因的微卫星标记多态性进行分析,并结合临床参数进行多因素非条件logistic回归分析。结果 单因素非条件logistic回归分析结果有显著意义的变量为年龄,收缩压,空腹胰岛素,胆固醇,甘油三酯,高密度脂蛋白,低密度脂蛋白,载脂蛋白B,脂蛋白(A),UCP3等位基因1、3、6和7,HSL等位基因5和9。多因素非条件logistic回归分析发现,2型糖尿病的发病与UCP3等位基因6和7、收缩压、载脂蛋白B、脂蛋白(A)呈正相关,与HSL等位基因5、高密度脂蛋白呈负相关,均具有统计学意义。结论 UCP3基因等位基因6和7、收缩压、载脂蛋白B、脂蛋白(A)在南京地区汉族人群2型糖尿病的发病中可能起一定的作用,而HSL基因等位基因5、高密度脂蛋白可能起一定的保护作用。
=关键词> 2型糖尿病;基因;危险因素;非条件logistic回归分析
Multivariatelogisticregressionanalysisontheriskfactorsoftype2diabetesmellitus LUYibing*,MIAOHeng,WANGHua,etal.*DepartmentofEndocriology,TheSecondAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing210011,China
=Abstract> Objective Toexploretherelationshipbetweenmultivariatefactorsandtype2diabetesmellitus.Methods Polymorphismsofmicrosatellitemarkersinuncouplingprotein3(UCP3)gene,hormone-sensitivelipase(HSL)geneandproteintyrosinephosphatase-1B(PTP-1B)geneweretestedin106patientswithtype2diabetesand102controlsubjectsbyperformingpolymerasechainreaction(PCR),polyacrylamidegelelectrophoresisandsilverstaining.Multivariatelogisticregressionanalysiswasperformedbyallfactors.Results Throughunivariateanalysis,type2diabeteshadsignificantlypositiveassociationswithage,systolicbloodpressure(SBP),fastinginsulin(FINS)level,cholesterol,triglyceride,low-densitylipoprotein,apolipoproteinB(ApoB),Alipoprotein,UCP3geneallele6,UCP3geneallele7,HSLgeneallele9,andnegativeassociationswithUCP3geneallele1and3,HSLgeneallele5,high-densitylipoprotein.TheresultsofmultivariatelogisticanalysisshowedthatUCP3geneallele6,UCP3geneallele7,SBP,ApoB,Alipoproteinwerestillpositivelyrelatedtotype2diabetes,whileHSLgeneallele5,high-densitylipoproteinwerestillnegativelyrelatedtotype2diabetes.Conclusion OurdatashowedthatUCP3geneallele6,UCP3geneallele7,SBP,abnormityofplasmaApoBandAlipoproteinmightplayaroleinthedevelopmentoftype2diabetes.HSLgeneallele5,high-densitylipoproteinmightplaysomeprotectiveroleinthedevelopmentoftype2diabetes.
=Keywords> Type2diabetesmellitus;Gene;Riskfactors;Multivariatelogisticregressionanalysis
流行病学研究显示2型糖尿病具有强烈的遗传基础,由于牵涉到多个基因及环境因素的多重影响,使得糖尿病的发病机理异常复杂,至今病因仍然不
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39500072);江苏省教委科研基金资助项目(99KJB320002)
作者单位:210011南京医科大学第二附属医院内分泌科(鲁一兵、缪珩);南京医科大学第一附属医院内分泌科(王华、何戎华);南京大学医药生物技术国家重点实验室(金卫新、华子春)
明。以前的流行病学调查已发现一些因素与2型糖
尿病发生有关[1],但研究中较少与2型糖尿病发病可能相关的基因等一些遗传因素进行综合分析。因此,我们对南京地区汉族106例2型糖尿病患者和102例正常对照者解偶联蛋白3(uncouplingprotein3,UCP3)基因、激素敏感脂酶(hormone-sensitivelipase,HSL)基因和蛋白酪氨酸磷酸化酶1B(proteintyrosinephosphatase-1B,PTP-1B)基因各
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中华流行病学杂志2001年8月第22卷第4期 ChinJEpidemiol,August2001,Vol.22,No.4
回归分析,从分子流行病学角度初步探讨它们在2型糖尿病病因中所占的地位。
材料和方法
一、研究对象
根据1985年WHO糖尿病诊断标准,选择门诊2型糖尿病患者106例(2型糖尿病组),男45例,女61例,平均年龄(58.06?10.21)岁。同时期健康体检者102例(对照组),男42例,女60例,平均年龄(62.20?10.74)岁,经75g葡萄糖耐量试验排除糖尿病。以上研究对象均为南京地区汉族,无血缘关系和糖尿病家族史,分别进行流行病学问卷调查,测量身高、体重、腰围、臀围。
二、方法
1.临床检测:所有研究对象分别测定空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(PBG)、空腹胰岛素(FINS)、餐后2h胰岛素(PINS)、空腹C肽(FCP)、餐后2hC肽(PCP)、血浆胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白A[Lp(A)]。
2.微卫星标记多态性检测:取外周血白细胞,酚-氯仿抽提DNA。PCR引物由上海生物工程公司合成。引物设计来源于PC-GDB(genomedatebase)(http://gdbwww.gdb.org)。UCP3:上游引物5c-CAGACTATTCTCATTGCTGC-3c,下游引物5c-GGACTTCTAAGCCTCCATAA-3c。HSL:上游引物5-'CTCAGCAGGGAAACAGGACTG-3',下游引物5-'GTTTGAGCCACTGCACTCAGC-3'。PTP-1B:上游引物5-'GCATATACATGGAGGGGGAA-3',下游引物5-'GATTTTCAGGTGGATAAGATTAGC-3'。PCR反应体积25Ll,基因组DNA100ng,引物
0.375Lmol/L,MgCl21.5mmol/L,dNTP200Lmol/L,Taq酶1U(ShanghaiPromega公司生产)。PCR条件:94e预变性5min,继之35个循环,每个循环中变性94e45s,退火58e45s,延伸72e45s,最后72e再延伸5min。PCR仪采用PerkinElmer公司480型。4%变性聚丙烯酰胺凝胶60W电泳1h(电泳仪为ECPS3000/150,Pharmacia)后银染,参照分子量标记pBR322DNA/MSPIMarker,读取等位基因的编码。
三、数据处理与统计学分析
=((2
2
比值(WHR)=腰围/臀围。基因型分布作Hardy-Weinberg平衡吻合度检验。以2型糖尿病发病与否为因变量(y=0,1),以所选择的研究因素为自变量,按表1的规格量化。采用SPSS8.0forwindows统计软件进行单因素非条件logistic回归分析,在此基础上选择有意义的变量,进行多因素非条件logistic回归分析。
表1 主要研究因素及赋值方法
自变量
性别年龄(岁)BMIWHR收缩压(SBP)
*
赋 值 方 法
男=0;女=1
60=227=21.0=221.33=2
12.67=225=275=2400=21500=26.0=21.8=21.6=23.0=22.0=21.2=2300=2
不含该等位基因者=0;含该等位基因者=1不含该等位基因者=0;含该等位基因者=1
舒张压(DBP)*FINS(mIU/L)PINS(mIU/L)FCP(pmol/L)PCP(pmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-c(mmol/L)LDL-c(mmol/L)ApoA1(g/L)ApoB(g/L)Lp(A)(mg/L)UCP3各等位基因HSL各等位基因
PTP-1B各等位基因不含该等位基因者=0;含该等位基因者=1 *计量单位为kPa
结 果
1.基因型分布:106例2型糖尿病患者和102例正常对照中分别检出UCP3基因8种等位基因片段:1(135bp)、2(137bp)、3(139bp)、4(141bp)、5(143bp)、6(145bp)、7(147bp)、8(149bp),共18种基因型。HSL基因7种等位基因片段:3(232bp)、4(234bp)、5(236bp)、6(238bp)、7(240bp)、8(242bp)、9(244bp),共15种基因型。PTP-1B基因8种等位基因片段:1(177bp)、2(179bp)、3(181bp)、4(183bp)、5(185bp)、6(187bp)、7(189bp)、8(191bp),共19种基因型。3个基因的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。
2型糖尿病组和正常对照组UCP3、HSL、PTP-1B基因各等位基因频率分布的比较发现UCP3等位基因6、7与2型糖尿病的发生呈显著性正相关,
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相关。并分别在两组中对有该等位基因与没有该等位基因者的临床参数进行比较,结果差异无显著性。2.单因素非条件logistic回归分析:在所选择的41个变量中,与2型糖尿病发病呈显著性正相关的变量有:年龄(OR=1.6784)、SBP(OR=1.9090)、FINS(OR=1.9112)、TC(OR=1.9930)、TG(OR=1.6324)、LDL-c(OR=2.1326)、ApoB(OR=2.9848)、Lp(A)(OR=1.9167)、UCP3等位基因6(OR=7.2014)、UCP3等位基因7(OR=9.1246)、HSL等位基因9(OR=7.1318)。与2型糖尿病发病呈显著性负相关的变量有HDL-c(OR=0.6461)、UCP3等位基因1(OR=0.3121)、UCP3等位基因3(OR=0.5123)、HSL等位基因5(OR=0.4149)。3.多因素非条件logistic回归分析:将单因素分析P值
表2 多因素非条件logistic回归分析结果
自变量SBPApoBLp(A)UCP36UCP37HSL5
B0.5500.7550.4651.6311.820-1.025
s