实验六植物单细胞培养

实验六 植物单细胞培养

实验目的：学习常用植物单细胞培养的方法

实验原理：在适宜的条件下，一个来自已分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培养可以发育成同其亲本一样的完整植株。植物组织培养技术的重要理论基础是植物细胞的全能性。

实验用具：净化工作台，镊子、移液枪、涂布器、摇床。

实验步骤：

1、制作用于单细胞培养的培养基

2、将愈伤组织进行振荡培养，使其分散成小的细胞团或单细胞，然后用适

当孔径的不锈钢筛网过滤，除去大的细胞团和残渣，离心除去小的残渣，得到单细胞悬浮液。

3、平板培养法：单细胞悬浮液的制备（外植体、愈伤组织、原生质体）→ 单

细胞悬浮液的密度调整（调整后的密度为植板细胞密度的2倍） → 固体培养基的配制 → 单细胞悬浮液与固体培养基等量混合 → 暗培养（培养期间对细胞频繁的镜检会对细胞的生长产生有害作用，应尽量减少镜检次数） → 继代培养（选取生长良好的由单细胞形成的细胞团，可以获得由单细胞形成的细胞系）。特点：操作简便，分离单细胞系较容易，但培养细胞气体交换不畅。

4、液体培养：分离方法同“3” 液体浅层培养。优点：操作简单，对原生

质体的损伤小，且易于添加新鲜培养基和转移培养物。缺点：原生质体分布不均匀，常常发生原生质体之间的粘连现象而影响其进一步的生长和发育。此外，难以跟踪观察某一个细胞的发育情况。

作业：每隔2~4h观察各自培养的结果，会出培养结果图。