中华医学遗传学杂志;998年X月第;P卷第H期
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!临床遗传学研究!
粘多糖贮积症!型患者"#$基因的一个新突变
张春芽
李麓芸
刘上峰
傅俊江
卢光琇
摘要#目的研究粘多糖贮积症$型%患者的艾杜糖:硫"$5$9;:&’()*)+,-.((/.012)-1-3,*4678酸酯酶%基因的基因突变@方法应用聚合酶链反应:单链构象多态性:;:5912’0)?8对患者的D%::9EF基因可*)+,&40.-4(/.1关键词#粘多糖贮积症$型R艾杜糖:硫酸酯酶基因R基因突变R聚合酶链反应:单链构象多;:"态性
cdeiciUVWVXWYZ[Z\][V^_‘W]WYZ[%abf9Z\Yg‘hZ[]WVj‘k\]W]jVlV[V\ZhWmVn]WYV[W^YWmp_‘XZnZkoj]XXm]hYgZjYjWonV(:’&xux{y~
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筛查所得的点突变OP;IH$患Q可能是该678
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硫酸已酰肝素%5?9G59@临床表-’+=.34Q8/4*.0131
PS
预后甚差@本病目前尚无有效治疗方法R常用的酶测定法5;S并不能P因此5进行基因诊断和产99T准确地鉴定携带者R5
HS
前诊断是预防该病例发生的有效方法R我们对一个67@$家8
系进行了DEF基因突变检测@b对象与方法
男5汉族5足月顺产@P岁后出现进行性b(b对象患者5L岁5加重的反应迟滞5走路不稳5智力低下5耳聋5不能说话5在北京
协和医院就诊5检验结果示葡萄糖苷酸酶%KI;(:正常值范围贮积症Z型和[型5染色体检查示8X5%%;J9@根据P\5=0.P9F
临床表现和酶的变化5初步诊断为67身高P$型@查体
作者单位
卢光琇5通信作者
万方数据
侧腹股沟斜疝5爪形手5四肢活动小@该患儿出生时父亲;X岁G母亲;表型均正常5非近亲结婚5家族中无类似病史@J岁5b(c7BC扩增引物序列
在已报道的突变外显子中选取其中
t398t
中华医学遗传学杂志388%年!月第3#卷第.期
"88%"
扩增片段
长度.88%!#%9,.#8%#9表()*+引物序列及扩增产物长度
外显子3
.,9:引物序列,-[***********][***********][***********][***********][***********][***********][1**********]
@结果
硫酸@
酯酶基因第9外显子*而>6扩增片段出现异常单链电泳带"未患病的父母电泳带一致’@
对患者及正常人的艾杜糖‘硫酸酯酶基因第3‘
发现患者9外显子的5载体克隆产物测序结果如图#6所示"为点突变/经R#3,.7i52"j1OU^服务器中的5[OFUDOZY软件翻译后"得知是原由7转变为5265编码的天冬氨酸/6U165编码的酪氨酸/2/.8:*ik2’经检索为一个国际上尚未发5[^现的新突变’图#作d是正常人lmn基因第9外显子测序结果"为对照’
由于7i5突变产生了限制性内切酶6\h\酶切位点"含有6\h酶切位点的患者及其母亲*\>6的A4B@K=酶切分析
引物序列.-[***********][***********][***********][***********][***********][***********]67464654
(
氯仿法抽提患者及其父母外周(6抽提按常规酚?
血白细胞基因组*>6’的反应总体积中含下列物质E(6模板8约#蒸馏水
?"55A#CDOP多聚酶8DCDR型A条件如下ES:S;外显子的A4B扩增仪上完成第.4B扩增"后";,T预变性;8U;%T变性%8U",,T退火.8U"93T延伸%8完成.放置于%,个循环V93T延伸,HW"T保温’同样在"FU;988型AS,S9外显子的AAR4B扩增仪上完成第34B扩增"其余条件如前’各取%C8U",%T退火%DA4B产物用3X琼脂糖凝胶检测"均有产物且条带大小相符’单链构象多态性/UWFGDYUZ[OFN\IF]I[HOZWIF
和银染取%C产物"与%C变性2‘1ID^HI[1_WUH"++4ADDJWU
缓冲液$8
混合"&;:T变性,HW"#8X蔗糖/a?b2F后立即置冰上3HWF
电压#:X中性聚丙烯酰胺凝胶电泳"8
(6测序将:常电泳带的标本A转化到4B产物连接到AQ4H‘5载体上"
8,大肠杆菌’所得重组克隆用6d.99‘.自动测序仪完成fM#)测序’
取A各加内切酶"4B产物各.CD
宝生物公司"大连2和6\h/#3Q?"8
扩增产物经酶切作用后"均出现了#.,09,01和#1的两条带"
证明确实存在突变’母亲还有.表明母亲是该突#801#条带"变的携带者"而未发生突变的父亲仅有.符合该#801#条带"病o连锁隐性遗传的特点"如图3所示’=讨论
粘多糖贮积症p型#首次;#9年由加拿大4_O[DYUqrFZY[报道"因此又称qr综合征"是一种罕见的致死性o连锁隐FZY[性遗传病’发病率美国报道为#s3,888活产男婴’粘多糖贮积症p型由于溶酶体酶艾杜糖‘硫酸酯酶缺乏所致"3‘*+和在全身脏器和组织内沉积而发病"共有特征为病q+不能降解"变呈进行性"多脏器和组织受累/包括骨骼S关节S眼S耳S齿S皮肤S心血管S肝脾和中枢神经系统2大量粘多糖在溶酶体内贮"
%&积出现症状伴有粘多糖尿$’
至今为止报道l39
,‘9&$:&
括#’#;;#年a[.个外显子$OWZ_等报道了第一例突变后"人类突变数据库已报道l突变发生在各:9种突变"mn基因有3
图(lmn基因第9外显子测序结果正常人测序结果"黑线示为突变对应部位/患者测序结果"箭头示为突变部位/#3,.2#3,.7i52VdE6E
万方数据
中华医学遗传学杂志/@@8年X月第/.卷第0期
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图!患者及其父母的"#$基因第%外显子扩增产物经&’’(酶切电泳图
)*+,&分子量标准-.
*父亲-/*患者-0*母亲个外显子但并不是平均分配整个"#$基因上的1
其中以第02324外显子突变最多见546
7突变类型涉及错义突变2无义突变2插入突变2剪切突变等1点突变中有8%9发生在核苷酸:;
位置1其中&=?改变几乎占了3@95.@6
7国外对粘多糖贮积症A型的分子遗传学分析早已开展1如.44.年)B’CDEE等5..6对.F3例病例进行分析1且"#$基因新突变检出率较
高5./67至今为止我们对中国人群中两例患者进行过突变分析1
筛查所得该突变均为新突变1在国际人类基因突变数据库中尚未查到1经文献检索证实该突变未见报道7以色列的GEHIHJHKB
等5.06报道./个家庭有.@个是有&LCMNOBPD或)HKH’’BO血统1且该人群新突变检出率低1认为)QR
A存在种族相关性7本病是S连锁隐性遗传病1患者母亲作为携带者再生育患儿和携带者的机率为F@97以往诊断本病只能根据临床表现和外周血中酶的变化1对疑难病例2症状前患者2表型正常的突变携带者都无法确诊1但是及早筛出突变携带者和及早诊断出症状前患者意义重大1不仅有利于携带者和轻型或症状前患者对其职业和婚姻早做打算1而且可以通过遗传咨询和产前诊断1
生育正常的后代7早在.44F年THOLLHO等5.86就联合应用Q:U扩增"#$基因’+,&2自动测定"#$基因编码区和计算机软件分析完成了.@例患者的基因诊断5.867我们认为Q:U2Q:U
>RR:Q2Q:U>UVWQ和+,&序列测定方法的联合应用可以简
单2快速2有效地对该遗传病常见位点作出明确诊断1整个过程.周内可以完成1
而且费用少1可在高发区和有患者的家系中进行携带者筛查5.F1.X6
7联合应用上述方法我们成功的对此家系"#$基因的较常见的X个外显子进行突变筛查1
检出第%外显子发生了&L;0@3Y?ZK
1即天冬氨酸突变为酪氨酸1即由一个酸性氨基酸突变为碱性氨基酸1这一突变可能改变了[+R蛋白质构象1从而可能影响了该酶的活性7该突变的发现为)QRA病的发病机理的阐明及)QRA患者家系的产前诊断或孕前诊断提供了依据7
基于该病的酶替代治疗和基因治疗目前都尚处于研究阶
段1未能取得确实有效的临床疗效5.%61
我们对该患者进行了基因诊断后1建议患儿家属对患儿采用对症治疗的方案1并建议该患儿母亲再生育时可行产前基因诊断或植入前遗传学诊断1防止再生育粘多糖贮积症A型患儿的风险7
参
考
文
献
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收稿日期*/@@0>@X>/8ml本文编辑刘萍m
粘多糖贮积症Ⅱ型患者IDS基因的一个新突变
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
张春芽， 李麓芸， 刘上峰， 傅俊江， 卢光琇
410078,长沙,中南大学生殖与干细胞工程研究所,中信湘雅生殖与遗传专科医院中华医学遗传学杂志
CHINESE JOURNAL OF MEDICAL GENETICS2004,21(3)15次
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