细菌培养实验流程
一． 配置培养基
二． 培养基灭菌
三． 倒平板
四． 采样
五． 细菌培养
六． 计数，结果计算
一. 配置培养基
1. 称量：按配置300ml 培养基的量称取平板计数琼脂（PCA ）7.05g ，倒入烧杯中。
2. 溶化：在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后在石棉网上加热时药品溶解。
待其完全溶解后，补充水到所需要的总体积300ml 。加热过程中需要不停搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂
3. 分装：将配置的培养基分装入三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
4. 加塞：培养基分装完毕后，在三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好 的通气性能。
5. 包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸或旧报纸，以防止灭菌时冷凌水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称，组别，配置日期。
二. 培养基灭菌
1. 装锅：先向外层锅内加入适量的水，（液面达到支撑三角架高度）并装入待灭菌物品。
2. 加盖：将盖上的排气软管插入内层的灭菌桶的排气槽内，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，勿使漏气。
3. 灭菌：加热，并同时打开排气阀，待冷空气完全排尽后，关上排气阀，升温至121℃，103kPa 时维持20min 。
4. 降温取物：灭菌结束后，切断电源，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，开盖取物。
三. 倒平板
1. 将无菌平皿，灭菌后的三角烧瓶，酒精灯，记号笔放入无菌柜中，开臭氧消毒10min
2. 臭氧消毒结束后等待10min 开始倒平板，点燃酒精灯放置于瓶口的下方，倒入溶化后冷却至45℃的琼脂培养基约 10~15ml，置水平位置，迅速旋动均匀，待凝固后，倒置备用。并从1开始顺序编号。
四. 采样
1. 规则：每次采样使用6~10个平皿，第1个平皿作为空白试验，消毒前采样取两个点使用2~4个平皿，消毒后采样取3~5个点使用3~5个平皿。
2. 采样高度：与地面垂直高度80~150cm。
3. 布点方法：室内面积30㎡， 设东，西，南，北，中5点，其中东，西，南，北点距墙1m 。
4. 采样方法：用浮游微生物采样器在采样点抽空气500L （5min ）后送检培养。
或者用9cm 直径营养琼脂平板在采样点暴露5~10min后送检培养。
5. 采样时间：消毒机工作前安排人员模拟现场环境活动，谈话10min ，然后取两个点采样后送检培养。消毒剂开启光催化消毒1~3小时后，取3~5个点采样后送检培养。
五. 细菌培养
将有编号的培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h~48h
六. 计数，结果计算
1. 取出培养平皿，算出几个所测平板上的菌落平均数N 。
2. 结果计算
空气细菌菌落总数（cfu/m³）=50000N/AT
式中：A--平板面积，C ㎡；
T--平均暴露时间，min
N--平均菌落数，cfu/平皿。