胰岛素和肾上腺素对血糖的调节(葡萄糖氧化酶法)
实验目的:
1.了解血糖浓度测定的原理和方法。
2.了解并验证胰岛素和肾上腺素对血糖的调节。
3.在实验中培养严谨的作风和准确进行实际操作的能力,提高分析问题的能力。 实验原理:
胰岛素和肾上腺素是体内对血糖调节的激素,胰岛素是唯一降低血糖的激素。通过对实验动物分别注射不同的激素,了解激素对血糖的调节影响。
测定血糖的原理:在PH7.0条件下,葡萄糖氧化酶可催化葡萄糖生成葡萄糖酸和H2O2,后者在H2O2酶的作用下与苯酚、4-氨基安替吡啉生成红色醌类物质,在505nm处有最大吸收峰,吸光度与葡萄糖含量成正比。
实验器材:
[器材]:10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴、沸水浴、冰浴、蜡笔、721-分光光度计、兔台、注射器、手术刀片。
[试剂]
1.酶酚混合试剂主要成分 :
① 葡萄糖氧化酶 ② H2O2酶 ③ 苯酚 ④ 4-氨基安替吡啉
2.葡萄糖标准储存液(100mmol/L)
3.葡萄糖标准应用液(5mmol/L) 取葡萄糖标准储备液5ml,置于100ml容量瓶中,加苯甲酸溶液至刻度。
4.胰岛素注射液
5.肾上腺素注射液
实验内容与方法:
一、注射药物并取血:
1.分别取2只兔子,称量体重,从耳缘静脉采血2ML。
2.2只兔子按体重分别注射肾上腺素和胰岛素,从注射药物时开始计时,每隔30分钟取血一次,一共取血4次,每次2ML。
二、血糖的测定
1.取16×150mm试管3支按下表进行操作:
试剂(ml) 测定管 标准管 空白管
血清或血浆 0.1 — —
葡萄糖标准应用液 — 0.1 —
蒸馏水 — — 0.1
酶酚混合试剂 3.0 3.0 3.0
2.将上述各管混匀放入37℃水浴中加热15分钟,用波长505nm分光光度计进行比色,空白管调零点读取测定管与标准管吸光度。
3.计算
测定管吸光 血糖(mmol/L)= 标准管吸光
4.计算注射药物前后血糖变化情况。
实验注意事项:
血清加量要准,否则会影响到结果的准确性。
实验报告:
思考题:
1.实验结果如何,分析结果。
2.讨论血糖升高和降低的临床意义及其维持恒定的因素? 度