贵州大学
茶树育种学实习指导书
(茶学专业)
茶学教研室编写
农学院 2014年11月
前 言
本实习指导书是根据茶树育种学教学大纲编写的，以茶树育种为主线，通过茶树生物技术育种、茶果采集与处理、茶树有性杂交、茶树标本制作、茶树不同品种茶叶感官审评等具体实践操作等活动使学生学生掌握茶树育种的基本理论、基本方法和基本技术，了解常见茶树育种的一些常规方法和技术，熟悉茶树品种之间的差异，为学生将来从事茶学科学研究或指导茶叶生产拓宽知识，也为他们今后从事茶树育种培方面工作奠定扎实的基础，为我省茶产业的发展提供的高素质技术人才。
本实习指导书主要涉及了茶树生物技术育种、茶果采集与处理、茶树种植资源圃管理、茶树标本制作、茶树不同品种茶叶感官审评等内容。
一、实习的性质与目的
《茶树育种学》教学实习是茶学专业实践教学的重要组成部分。通过在教学茶园现场组织学生进行实际操作，增强学生的感官认识，加深对茶树育种学理论知识的理解和应用，掌握茶树育种中的常规方法和具体操作技术，分析解决茶树育种中出现的问题。 二、实习的时间分配
三、实习地点选择
贵州大学教学茶园、贵州大学园艺基础实验室、贵州大学茶学专业实验室等。 四、实习内容安排与要求
（一）项目一：茶树标本采集与制作
1、实习内容： （1）蜡叶标本制作； （2）浸渍标本制作。 2、操作过程：
（1）蜡叶标本采集与制作：
标本的采集： 每组于品种园中剪取叶片完整无缺，无病虫害枝条两枝，采后立即挂上纸牌，注明品种名称、采集日期、地点、采集人、放入采集箱中带回室内。
标本的压制和整理：将采回枝条稍加整理，压入标本纸内，压时叶片需整平，不重叠。同时把1~2片叶反转使叶背向上。然后将枝条整齐安放在标本夹中，用绳索捆紧，放于通风
的斜射日光处吸水干燥，被压的头几天，每天需换水1~2次，以后每隔1~2天换纸一次，直至干燥时为止。
标本消毒：将标本铺于吸水纸上，用毛笔蘸取0.3%升汞浓酒精溶液，刷于标本反面，尤其是花果等重要部位应对刷几次，使之全部渗透到药液，边刷边盖纸，以免药液增发而损失，待刷完成，其上覆以吸水纸置于阳光下暴晒10~15min。晒时要防止风的吹袭而损坏标本，如有花果脱落，应放于小袋中与标本同时上台纸。
标本上台纸：每组取标本纸一张，将已消毒的标本安放于适中位置，台纸右下角留下贴放标签的位置，然后用铅笔轻轻描下记号，再用毛笔在标本背后涂上0.3%升汞胶水，再将标本按原位贴于台纸上，稍干，即用针线将标本钉牢，整份标本按实际需要钉3~5处，各针不能连续，结必须打在标本反面。盛放脱落花果的小纸袋贴于台纸左上角，同时将标签贴于台纸右下角。
（2）浸渍标本制作：
枝条标本浸渍法：将5g 醋酸铜溶于100ml 冰醋酸中，放置1~2天后即成饱和醋酸铜溶液，用时用水稀释4倍，煮沸后将标本投入继续煮沸，标本开始发黄15min 后又恢复至绿色，即可退火取出标本，用水洗1~2次，之后加5%甲醛溶液一份，蒸馏水9份，作为保存液装入标本瓶中放入上述标本，加盖用蜡打好即成。也可以用10%硫酸铜煮沸15min 后用水洗1~2次，用3%~4%甲醛溶液浸渍于标本瓶中，加盖打蜡即可。
幼果标本浸渍法：将10%硫酸铜溶液中煮沸5~10min，放入果实再煮沸15min 后取出用水洗1~2次，装入以甲醛：95%酒精：1N 硫酸：水配比为2：10：2：86配成的固定保色剂中。
茶花标本浸渍法：将氯化锌200g 、甘油1ml 、甲醛100ml 和蒸馏水4000ml 配成浸渍液（先将氯化锌溶于水），将茶花直接浸入，封盖打蜡即可。
根系浸渍标本制作：将根洗净，然后浸入5%甲醛溶液中，加盖封蜡即可。 （二）项目二：茶树有性杂交
1、实习内容：
对茶树种质资源圃进行冬季常规管理，包括茶园浅耕、除草、行间铺草、冬季修剪等。 （三）项目三：茶籽的采集与处理
1、实习内容：
采集新鲜茶籽并进行适当处理。 2、操作过程：
采集不同品种茶树茶籽，采用层积法，用湿沙层层覆盖后于4℃储藏。
（四）项目四：茶树生物技术育种
1、实习内容：
以茶树新鲜茶果为材料，以合适的培养基为介质，学习茶树组织培养的基本方法。 2、操作过程：
（1）培养基母液配制（见表1）： （2）培养基配制
1）称取蔗糖30g ，置于1000ml 烧杯中，加入母液Ⅰ100ml ，母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ各10ml ，母液Ⅵ20ml, 搅拌使蔗糖充分溶解。
2）称取琼脂5g ，置500ml 三角瓶，加蒸馏水300ml 左右，加温至沸，文火使其完全溶解（切勿溢出）。
3）将2倒入1内充分搅拌，加蒸馏水定容至1000ml ，倒入烧杯内，用0.1NHCl 或0.1NKOH 调至pH5.7左右。4）将3配制的溶液趁热用分注器，注入三角瓶中，每瓶20ml 。
5）将瓶口密封后置高压蒸汽灭菌锅内，110-130℃保温15min 。 6）将压力表降至零时，将培养瓶取出，平置与阴凉干净处。 （3）其他化学试剂配制
0.1NHCl100ml ；0.1NKOH100ml ；饱和次氯酸钙溶液（加少许肥皂水）。 （4）消毒及接种
1）容器消毒 直径10cm 培养皿10个（内置滤纸一张），100ml 烧杯3个分别装入牛皮纸袋，封口后于高压灭菌锅中消毒。
2）材料消毒及接种
将4℃下储存一周以上的新鲜茶果，去除果壳，置于70%乙醇的烧杯中，浸泡3min 转入饱和次氯酸钙溶液中，烧杯外部和内部与次氯酸钙不接触处，用浸有乙醇的脱脂棉擦洗后，放入已经消毒过的超净工作台内，15min 后，用灭菌水在无菌烧杯内充分洗净，置无菌培养皿内，备用。
用肥皂将手洗净，用浸有70%乙醇的脱脂棉将手擦洗一遍。
左手捏住茶籽，右手持无菌尖头镊子，从种脐处挑开茶籽种壳，将胚置于无菌培养皿内，从子叶炳处切除胚轴，将每片子叶切成4块，接种在培养基上，封好瓶口。
置22-30℃，光强1500lx ，光照12h 培养箱或培养室培养。 （5）注意事项
超净工作台周围环境必须洁净，最好每次使用前用灭菌剂消毒。
防止人身带入杂菌。
操作时用的镊子、解剖刀最好每操作一次在70%乙醇溶液中浸泡好，在酒精灯上烤干。
表1 茶树组织培养培养基母液的配制
（五）项目五：不同品种绿茶感官品质比较
1、实习内容：
选用较有代表性的几款绿茶，应用大宗绿茶审评法进行审评，比较不同绿茶在外观和内质上的感官差异。
2、操作过程： （1）、外形审评
各茶叶放入杨茶盘中，摇盘后观察比较茶叶外形、嫩度、色泽、整碎、净度等因子。 （2）、内质审评
在洁净托盘天平上称取3g 茶叶放入已用沸水烫过审评杯（150ml ）中，用100℃沸水冲泡。每杯泡水齐杯的缺口，随泡随盖，杯盖的小孔靠近杯柄一边。从冲泡第一杯起即应记时，经5min 将杯内茶汤倒入审评碗内，要求全部倒尽，接着嗅香气、评汤色、尝滋味、看叶底。
取不同等级的绿茶按上述方法开汤审评，判别各类茶叶在滋味、香气、汤色、叶底上的区别。 基本要求：
（1）实习学生全程参加实习过程，无特殊情况时不准请假。 （2）注意保护茶园各种作物。
（3）严格按学校的作息时间或实习安排时间进行活动。 （4）认真对待实习内容。
（5）根据实习内容，写出实习报告。 五、注意事项
1、实习期间要按时完成各项教学任务。
2、在校内外实习期间要做到遵守学院和实习单位的各项规章制度及操作规程。 3. 实习全过程中，注意保持高度的安全与防范意识。 六、实习报告要求
每位学生根据每个实习项目所作的内容写一份实习报告，最后写一份总的实习总结。 实习报告和实习总结写的内容要详细，每份实习报告中要写清实习时间、地点、内容等。实习总结需将整个实习的内容全部概括。 七、成绩评定（实习考核及成绩评定方法）
1、实习表现：占50％；
2、实习报告内容（总结）：占50％； 八、实习报告格式
实习报告必须用学校规定的实习报告专用纸。其格式如下。
实习（编号） 实习项目名称
（一）实习时间 （二）实习目的
（三）实习内容：要涵盖所实习的全部内容。
贵州大学实习报告专用纸
学院： 专业： 姓名： 学号： 班级： 实习性质： 指导教师：
实习地点：
成绩：