抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)
简介：
酸酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP) 分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5～5.5。
Leagene 抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色，产物黄色越深。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考) ：
1、 配制检测工作液：
① 配制显色工作液：新配制的显色工作液应在6h 内用完。 ② 配制标准品工作液。 2、 准备样品：
① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离
心取上清，-80℃冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酯酶的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的
测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用原有的裂
解液或PBS 等进行稀释，也可以采用ACP Assay buffer稀释。
3、 加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。标准品的用量分别为4、8、16、24、32、40μl ，待测样品直接加40μl 。如果样品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
4、 轻轻混匀，孵育。
5、 每孔加入Stopping Solution终止反应。
6、 检测405nm 处吸光值，如果无法检测405nm ，亦可检测400～415nm 范围内吸光值，
一般应数小时内检测完毕。
计算结果：酸性磷酸酶活性单位的定义：pH4.8 37℃条件下，每分钟水解
para-nitrophenyl phosphate 显色底物产生1微摩尔p -nitrophenol 所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。
注意事项：
1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、 建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。 3、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检
测体积，尽量采用小体积的比色杯。
4、 所测样本的值高于标准曲线的上限，应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。 5、 一支显色工作液配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。 6、 待测样品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min 。 7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。